肺透明膜病新生兒ECR1（CD35）基因多態(tài)性、數(shù)量及天然免疫活性的變化.pdf

1、目的：新生兒肺透明膜病(hyalinemembranedisease,HMD)，又稱新生兒呼吸窘迫綜合征(neonatalrespiratorydistresssyndrome,NRDS)是臨床新生兒尤其是早產(chǎn)兒常見的危重綜合征。重癥病例均于2天內(nèi)死亡，其中重要原因之一為繼發(fā)性細(xì)菌感染，存活32小時(shí)以上者常合并肺炎。隨著呼吸機(jī)輔助呼吸以及肺表面活性物質(zhì)應(yīng)用等新生兒救治技術(shù)的不斷提高，患兒存活率不斷提高。但因HMD患兒尤其是重癥患兒多需氣

2、管插管呼吸機(jī)輔助呼吸使氣道開放，并且氣管內(nèi)吸痰等侵入性操作增加，使肺部甚至全身受感染機(jī)會增加。存活者中肺炎甚至慢性肺疾病CLD(chroniclungdisease)的發(fā)病率和病死率也隨之增加。故臨床除需注意無菌操作外，機(jī)體免疫狀態(tài)的變化與HMD病理變化、病情演變及預(yù)后的關(guān)系也至關(guān)重要。 天然免疫(非特異性免疫)是機(jī)體防御反應(yīng)中的重要環(huán)節(jié)。紅細(xì)胞是重要的天然免疫細(xì)胞，其許多免疫功能是其它免疫細(xì)胞所無法代替的。當(dāng)致病原進(jìn)入血液循環(huán)

3、時(shí)，紅細(xì)胞可免疫粘附致病原產(chǎn)生快速免疫粘附反應(yīng)，激起一系列天然免疫和適應(yīng)性免疫反應(yīng)。紅細(xì)胞的免疫黏附功能是通過紅細(xì)胞Ⅰ型補(bǔ)體受體(Complementreceptor1onerythrocyte，ECR1)為基礎(chǔ)實(shí)現(xiàn)的。目前研究表明紅細(xì)胞粘附腫瘤細(xì)胞能力與ECR1密度基因多態(tài)性呈正相關(guān)，紅細(xì)胞清除免疫復(fù)合物的能力與ECR1數(shù)量密切相關(guān)，而ECR1基因HindⅢ多態(tài)性決定ECR1在紅細(xì)胞表面的數(shù)量表達(dá)。 ECR1基因多態(tài)性、數(shù)量表

4、達(dá)及粘附活性的變化對許多疾病的發(fā)生、發(fā)展及病理過程有著密切相關(guān)。臨床多種疾病的紅細(xì)胞免疫功能測定對疾病輔助、鑒別診斷、療效觀察、預(yù)后判斷、病情轉(zhuǎn)歸方面都有重要意義。在成人多種疾病已有研究并取得成績，但新生兒領(lǐng)域報(bào)道甚少。本文將研究新生兒及HMD患兒的ECR1基因多態(tài)性表達(dá)、數(shù)量及活性變化規(guī)律，為臨床判斷病情、預(yù)后，指導(dǎo)臨床用藥提供依據(jù)，達(dá)到及時(shí)救治、降低病死率，減少后遺癥，提高患兒生活質(zhì)量的目的。 方法：本試驗(yàn)中所有研究對象均來

5、自河北省兒童醫(yī)院新生兒科在2004年11月至2005年6月收治的新生兒，分為兩組。病例組16例[性別比(男/女)=11/5；胎齡：33.25±3.66周；體重：2.01±0.35千克；產(chǎn)式比(剖宮產(chǎn)/順產(chǎn))=7/9]，其中未應(yīng)用肺表面活性物質(zhì)固爾蘇者4例(其中2例因家庭經(jīng)濟(jì)困難于入院后第2天及第3天放棄治療)，后期合并肺炎者2例。其臨床表現(xiàn)及胸部X光表現(xiàn)和血?dú)夥治鼋Y(jié)果均符合新生兒肺透明膜病診斷，無感染性疾病表現(xiàn)；對照組為同期我院在新生兒

6、科住院寄養(yǎng)無其他合并癥的早產(chǎn)兒，共26例[性別比(男/女)=17/9；胎齡：33.69±1.74周；體重：2.06±0.56千克；產(chǎn)式比(剖宮產(chǎn)/順產(chǎn))=13/13]。兩組患兒在出生性別、出生體重、胎齡和產(chǎn)式比上無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P均＞0.05。 新生兒肺透明膜病診斷參照第3版《實(shí)用新生兒學(xué)》。所有患兒的母親均無絨毛膜羊毛膜炎病史，分娩前均無激素、鎮(zhèn)靜劑、止痛劑及抗生素病史。兩組患兒均于生后24小時(shí)(病例組于應(yīng)用固爾蘇前采集)及

7、生后7天采集外周靜脈血(枸櫞酸鈉抗凝)1ml送檢。標(biāo)本于采血后2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)。將標(biāo)本離心(2000RPM)5min，取自身血漿100ul和沉淀紅細(xì)胞1ul，加到靶細(xì)胞管中，立即進(jìn)行ECR1天然免疫粘附功能(EIIAF)即ECR1活性的測定；取10ul沉淀紅細(xì)胞，用生理鹽水洗滌2次，固定后用酶聯(lián)免疫法定量測定ECR1分子的數(shù)量；上兩步使用后的全血充分混勻，取100ul全血加到1.5ml離心管中(留取備份)，于-20℃保存待檢，采用PCR

8、和HindⅢ酶切技術(shù)測定ECR1分子基因多態(tài)性。 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為雙側(cè)α=0.05。組間均衡性比較使用成組t檢驗(yàn)或x2檢驗(yàn)；兩組基因類型的構(gòu)成比較使用x2檢驗(yàn)；兩組間基因多態(tài)性、數(shù)量和活性比較采用兩樣本比較的Willcoxon秩和檢驗(yàn)；各組第1天和第7天基因多態(tài)性、數(shù)量及活性的比較使用Willcoxon符號秩和檢驗(yàn)；基因類型、數(shù)量和活性間的相

9、關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)。 結(jié)果：組間一般資料的比較差異無顯著意義，P均＞0.05。兩組間ECR1基因多態(tài)性構(gòu)成無顯著性差異，x2=2.660P＞0.05。具體構(gòu)成情況見表2及圖5。第1天和第7天比較，無論對照組還是病例組ECR1數(shù)量變化均無差異性(P＞0.05)，但ECR1活性在對照組和病例組中均有變化(統(tǒng)計(jì)量值分別為-3.424和-2.524，P均＜0.05)。第1天病例組和對照組ECR1活性差異有顯著性(z=-

10、2.126，P＜0.05)，但ECR1數(shù)量差異無顯著性(z=-1.493，P＞0.05)；在第7天病例組和對照組間ECR1數(shù)量和活性差異均無顯著性(P均＞0.05)。對照組ECRI基因類型和活性間存在相關(guān)性，等級相關(guān)系數(shù)分別為0.528、0.568，P均＜0.01，而其他指標(biāo)間無相關(guān)性(P＞0.05)。實(shí)驗(yàn)組3個(gè)指標(biāo)間均無相關(guān)性(P＞0.05)。 結(jié)論：1.對照組及病例組第7天ECR1活性均較第1天升高，提示隨日齡增加新生兒紅細(xì)

11、胞免疫粘附活性有增強(qiáng)趨勢。2.第1天病例組ECR1活性較對照組減低，提示HMD患兒ECR1活性受到了影響，其活性降低。病情恢復(fù)期ECR1活性升高，其升高程度較對照組高，提示HMD患兒ECR1活性隨病情恢復(fù)而提高。第7天ECR1的活性和對照組雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異，但是視覺上還是較對照低一些，說明其活性尚未完全恢復(fù)。3.兩組患兒第1天與第7天ECR1數(shù)量比較均無顯著差異，提示生后1周內(nèi)新生兒ECR1數(shù)量變化不明顯。兩組間ECR1數(shù)量差異無顯著

12、性，提示ECR1數(shù)量可能未受到新生兒肺透明膜病的影響。4.兩組間ECR1基因多態(tài)性構(gòu)成無顯著差異，說明ECR1基因多態(tài)性與新生兒肺透明膜病發(fā)病易感性無相關(guān)性。本研究結(jié)果第1天與第7天對照組ECR!基因類型和活性間均存在相關(guān)性，與郭峰等人研究中提到的紅細(xì)胞粘附能力與紅細(xì)胞CR1密度多態(tài)性呈正相關(guān)的理論相符。5.本研究未得到預(yù)期ECR1數(shù)量與活性的相關(guān)性的結(jié)果，考慮是因?yàn)镋CR1活性除受到CR1數(shù)量，尚受到其它因素的影響。6.因肺表面活性物

13、質(zhì)的合理應(yīng)用，及我院新生兒重癥監(jiān)護(hù)病房(NICU)無菌操作執(zhí)行嚴(yán)格，并發(fā)呼吸機(jī)相關(guān)肺炎者僅有兩例，這可能是本研究HMD患兒恢復(fù)期ECR1活性得以較快恢復(fù)的原因之一。 總之，急性期HMD患兒的紅細(xì)胞粘附能力下降，可能是HMD患兒的一個(gè)共同特征，可能與HMD患兒上呼吸機(jī)后易感染有一定關(guān)系。本研究提示紅細(xì)胞粘附能力與紅細(xì)胞CR1密度多態(tài)性呈正相關(guān)，ECR1基因多態(tài)性、及免疫粘附活性水平的測定，對HMD患兒感染易感性及轉(zhuǎn)歸預(yù)測，及時(shí)采取