2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的: 1.采用Taqman-MGB探針技術(shù),建立實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-RT-PCR)檢測Foxp3mRNA的方法。 2.對前列腺癌患者(PCa)、前列腺增生(BPH)患者、復(fù)發(fā)前列腺癌(PCaR)、治療后前列腺癌患者(PCaT)及健康對照外周血單個核細胞(PBMCs)的Foxp3mRNA進行熒光定量檢測并探討Foxp3表達變化的意義。 方法: 1.Foxp3mRNA的FQ-RT-PCR方

2、法建立:根據(jù)Genebank的Foxp3mRNA(NM_014009)序列,在Foxp3基因的外顯子6和7之間設(shè)計一對引物和一條Taqman-MGB探針,優(yōu)化反應(yīng)體系。 2.標準品的制備:用pMD18-T載體與普通PCR擴增所得的Foxp3cDNA片段進行連接,構(gòu)建重組質(zhì)粒作為標準品,將標準品10倍倍比稀釋后進行熒光定量PCR擴增,以拷貝數(shù)的自然對數(shù)為橫坐標,循環(huán)域值(Ct)為縱坐標制作標準曲線。 3.方法學評價:包括該

3、方法的靈敏性、特異性和重復(fù)性等。 4.臨床應(yīng)用研究:收集45例初診PCa、29例治療后前列腺癌、15例前列腺癌復(fù)發(fā)、54例良性前列腺增生(BPH)以及13例健康對照的PBMCs,對這些病例PBMCs的Foxp3mRNA含量進行的檢測,并分析Foxp3mRNA的表達量在前列腺癌發(fā)生發(fā)展中的意義。 結(jié)果: 1.成功建立了熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測Foxp3mRNA的方法,本方法檢測靈敏度為25拷貝/反應(yīng),線性范圍

4、為25~2.5x109拷貝/反應(yīng),Ct值與拷貝數(shù)之間具有良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為0.995。批內(nèi)、批間變異系數(shù)分別為3.02~4.13%和4.52~5.37%,重復(fù)性較好。擴增產(chǎn)物經(jīng)測序分析,結(jié)果進行BLAST同源比較,擴增片段與NM_014009序列符合率為100%。 2.PCa組Foxp3mRNA表達量的中位數(shù)(Foxp3mRNA/GAPDHmRNA×10000)為8.80(3.31~10.76)和PCaR組[20.39(

5、4.79~26.60)],都明顯高于BPH組[2.93(1.32~4.17)]、PCaT組[2.36(0.48~3.38)]及健康對照組[2.33(0.76~3.31)],差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01);PCa組與PCaR組的Foxp3mRNA表達量差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);BPH組、PCaT組的Foxp3mRNA表達量較健康對照組的不升高,三組之間的表達量差異亦不具有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 3.PCa組按病理

6、Gleason評分分成高、中、低三組,三組間方差不齊(P<0.05),故采用秩和檢驗比較差別。三組間Foxp3mRNA表達量無顯著性差異(P>0.05)。再對評分與Foxp3mRNA表達量進行Spearman’s相關(guān)分析,相關(guān)系數(shù)-0.235,P>0.05,F(xiàn)oxp3mRNA表達量與Gleason評分高低無明顯關(guān)系。但從數(shù)值上看隨著Gleason評分的增加Foxp3mRNA表達水平有下降趨勢。PCa不同臨床分期間Foxp3mRNA表達量

7、差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。將PCa組以是否發(fā)生骨轉(zhuǎn)移分成兩組,比較兩組間差異,兩組間無顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論: 1.熒光實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測Foxp3mRNA的方法具有靈敏、特異、準確、重復(fù)性好等特點。 2.Foxp3mRNA在PCa組和復(fù)發(fā)前列腺癌組(PCaR)的PBMCs中高表達,為研究Foxp3mRNA在PCa的發(fā)生發(fā)展中腫瘤免疫方面所起的作用提供部分實驗基礎(chǔ)。 3.F

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