人真皮間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)白癜風(fēng)患者皮損周圍CD8+T淋巴細(xì)胞表達(dá)和分泌IL-13的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、白癜風(fēng)是一種常見的皮膚色素脫失性疾病,其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,病因不明,治療困難,通常以黑素細(xì)胞的破壞或者缺失導(dǎo)致色素脫失斑的產(chǎn)生為特征。白癜風(fēng)可發(fā)生于任何年齡以及任何部位。近年來,該病的發(fā)病率有上升的趨勢。白癜風(fēng)主要影響患者的容貌,特別是顏面部皮損,給患者造成巨大的精神和心理壓力。本病病因復(fù)雜,確切的發(fā)病機(jī)制尚不清楚。發(fā)病機(jī)制有眾多學(xué)說,一般廣為接受的基本學(xué)說包括:遺傳學(xué)說,黑素細(xì)胞自毀學(xué)說,自身免疫學(xué)說以及神經(jīng)學(xué)說等。本病治療的手段多種多樣

2、,但是均不能達(dá)到令患者及醫(yī)生非常滿意的程度。
　　本課題組前期已經(jīng)將人真皮來源的間充質(zhì)干細(xì)胞和白癜風(fēng)患者 CD8+T淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)DMSC抑制患者CD8+T淋巴細(xì)胞的活性和增殖,并促進(jìn)其凋亡。并且,將DMSC與白癜風(fēng)患者皮損周圍CD8+T淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng),做了細(xì)胞因子芯片,分析比較各組細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子,研究發(fā)現(xiàn),患者皮損周圍CD8+T淋巴細(xì)胞和DMSC共同培養(yǎng)后,多種細(xì)胞因子分泌下降,其中IL-13的下降更加顯著。

3、>　　本實(shí)驗(yàn)以IL-13為靶點(diǎn),旨在研究IL-13在DMSC和白癜風(fēng)患者皮損周圍CD8+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)中可能發(fā)揮的作用。
　　目的：
　　初步探討人真皮間充質(zhì)干細(xì)胞(DMSC)對(duì)白癜風(fēng)患者皮損周圍CD8+T淋巴細(xì)胞分泌表達(dá)IL-13的影響。
　　方法：
　　應(yīng)用細(xì)胞增殖檢測法(MTS)檢測重組IL-13(rIL-13)對(duì)黑素細(xì)胞增殖的影響。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和蛋白質(zhì)印跡法(Weste

4、rn印跡法)分別檢測8例進(jìn)展期尋常型白癜風(fēng)患者皮損周圍及外周血中CD8+T淋巴細(xì)胞中IL-13基因和蛋白表達(dá)。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)技術(shù)和雙抗體夾心ELISA法分別檢測DMSC與白癜風(fēng)患者皮損周圍CD8+T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)前后細(xì)胞IL-13 mRNA水平和上清蛋白水平的表達(dá)。流式細(xì)胞術(shù)檢測rIL-13對(duì)CD8+T淋巴細(xì)胞的增殖及活性影響。
　　結(jié)果：
　　不同濃度(10,50,100,250,50

5、0μg/L)的rIL-13作用黑素細(xì)胞24、48、72、96h后黑素細(xì)胞的增殖與對(duì)照組比較均未見明顯變化(均P>0.05)。白癜風(fēng)患者皮損周圍及外周血中 CD8+T淋巴細(xì)胞均可表達(dá) IL-13,但皮損周圍 CD8+T淋巴細(xì)胞表達(dá)IL-13更顯著,將皮損周圍CD8+T淋巴細(xì)胞和DMSC共培養(yǎng),CD8+T淋巴細(xì)胞IL-13 mRNA(0.100±0.010)和蛋白表達(dá)水平(1509.62±148.44)均顯著低于單獨(dú)培養(yǎng)CD8+T淋巴細(xì)胞(