鐵載體蛋白基因（IRT1）轉化八棱海棠的研究.pdf

1、本實驗在實驗室原有八棱海棠再生體系的基礎上，主要采用了農桿菌介導法將IRTl基因轉入八棱海棠中，獲得了7個攜帶IRTl基因的八棱海棠株系。同時，本實驗還初步探討了利用超聲波輔助農桿菌介導的方法在煙草和八棱海棠基因轉化中的應用。研究結果如下： 1．超聲波輔助農桿菌介導方法(SAAT Sonication-assisted．Agnobacterium-mediated transformation)對模式植物煙草K326的基因遺傳轉化有非

2、常明顯的促進作用。在與單獨用農桿菌侵染的對照的比較中我們發(fā)現(xiàn)，在農桿菌侵染的過程中輔助超聲波處理，能獲得100％的gus基因瞬時表達率，并且外植體的染色面積大多大于50％。在用SAAT法將外源基因導入煙草的過程中，超聲波處理時間和處理強度是影響轉化效率的最主要因素。比較實驗發(fā)現(xiàn)，超聲波處理的時間和強度應該適度。綜合這兩大因素，強度為80％的超聲波處理40s能獲得最高的瞬時表達率。另外，研究還發(fā)現(xiàn)，超聲波處理時期也對外植體的轉化效率有一定

3、影響，認為在農桿菌侵染4min 40s后輔助超聲波處理能獲得最理想的轉化率。2．通過SAAT法在煙草轉化中的運用，我們初步探討了該種方法在目標植物八棱海棠轉化體系中的應用前景。實驗發(fā)現(xiàn)，適宜的超聲波輔助處理能夠比單獨使用農桿菌更為有效地將外源基因導入到八棱海棠中去。實驗結果表明，最佳處理是在農桿菌侵染4min 40s后輔助功率為70w的超聲波處理20s，此時外植體的Gus瞬時表達率為60％，并且外植體的褐化率低于23.3％。另外，比較發(fā)