小麥1Ax1突變基因的載體構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、小麥的加工品質(zhì)主要是由面筋彈性與黏性所決定,而面筋彈性取決于麥谷蛋白聚合物的含量及大小。麥谷蛋白聚合體是由小麥籽粒貯藏蛋白重要組成成分高分子量麥谷蛋白亞基(HMW-GS)和低分子量麥谷蛋白亞基(LMW-GS)通過分子間二硫鍵交聯(lián)而成。其中,高分子量麥谷蛋白亞基,尤其是優(yōu)質(zhì)亞基1Ax1、1Dx5+1Dy10與小麥加工品質(zhì)高度相關(guān)。與1Ax1亞基相比,1Dx5亞基表現(xiàn)更優(yōu),因為與攜帶1Ax1亞基的轉(zhuǎn)基因株系相比,攜帶有1Dx5亞基的轉(zhuǎn)基因株

2、系具有較強的揉混特性,推測原因是1Dx5亞基比1Ax1亞基在中間重復(fù)區(qū)近N-末端多出一個Cys殘基。
　　本文通過對1Ax1亞基進行定點突變,將1Ax1亞基中對應(yīng)于1Dx5亞基中間重復(fù)區(qū)Cys殘基位置的絲氨酸突變?yōu)榘腚装彼?構(gòu)建了突變基因1Ax1*真核表達載體,利用基因槍法將其轉(zhuǎn)化到L88-31盾片中,經(jīng)組織培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因植株,為進一步研究小麥HMW-GS中間重復(fù)區(qū)近N-末端Cys殘基與面筋彈性的關(guān)系提供了材料。主要的研究結(jié)果如下

3、:
　　(1)通過PCR法對1Ax1亞基基因進行定點突變,選擇胚乳特異性表達載體pLRPT為基礎(chǔ)載體,成功構(gòu)建了pLRPT-1Ax1*小麥胚乳特異性表達載體,目的基因由胚乳特異表達的1Dx5啟動子所驅(qū)動;
　　(2)對重組載體和標記基因載體pAHC25進行酶切鑒定后,利用基因槍法將二者共轉(zhuǎn)化到受體材料L88-31中;
　　(3)在DNA水平上,運用PCR法擴增Gus基因和CaMV35S終止子對轉(zhuǎn)基因植株進行分子鑒定,轉(zhuǎn)