前體淋巴母細(xì)胞淋巴瘤-急性淋巴母細(xì)胞白血病發(fā)生細(xì)胞的研究.pdf

1、目的：通過(guò)急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞系Jurkat，探討分離鑒定白血病干細(xì)胞的方法；初步探討分離及鑒定原代前體淋巴母細(xì)胞淋巴瘤/急性淋巴細(xì)胞白血病干細(xì)胞的方法。方法：流式細(xì)胞分析方法，檢測(cè)Jurkat細(xì)胞的分子表型；應(yīng)用CD34免疫磁珠分選CD34+細(xì)胞；單克隆培養(yǎng)方法獲得CD34-細(xì)胞；RT-PCR法分別對(duì)CD34+和CD34-單克隆細(xì)胞檢測(cè)CD34基因和腫瘤干細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)；體外軟瓊脂克隆和SCID小鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)CD34+

2、和CD34-細(xì)胞的克隆形成和致瘤能力；流式細(xì)胞分選方法，對(duì)原代急性淋巴細(xì)胞白血病中不同分子表型細(xì)胞進(jìn)行分選及RT-PCR法檢測(cè)急性淋巴細(xì)胞白血病中常見(jiàn)的染色體異位。 結(jié)果：Jurkat的細(xì)胞表型均符合分化的T淋巴細(xì)胞特點(diǎn)；在Jurkat細(xì)胞群中可以分出CD34+CD38+CD7+和CD34-CD38+CD7+兩群分化程度不同的細(xì)胞；體外培養(yǎng)和SCID小鼠體內(nèi)致瘤實(shí)驗(yàn)顯示CD34+細(xì)胞可通過(guò)CD34表達(dá)逐漸減弱的方式向CD34-細(xì)

3、胞分化，而這一分化過(guò)程是不可逆的；CD34+和CD34-克隆細(xì)胞在造血干細(xì)胞相關(guān)基因Wnt1，Bmi1，Lef1，ABCG2和端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因的表達(dá)上沒(méi)有差異；CD34+和CD34-細(xì)胞均可在體外無(wú)限增殖，形成單克隆細(xì)胞株，軟瓊脂克隆形成能力無(wú)顯著差別；CD34+和CD34-細(xì)胞在SCID小鼠體內(nèi)的致瘤能力無(wú)差異。 結(jié)論：磁珠細(xì)胞分選方法可以有效分選陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞；Jurkat細(xì)胞系中的所有細(xì)胞均具有T細(xì)胞免疫表型，提示Jurk

4、at細(xì)胞系的腫瘤發(fā)生細(xì)胞應(yīng)為已定向分化的表型為CD34+CD38+CD7+的T淋巴細(xì)胞祖細(xì)胞，而非造血干細(xì)胞；在Jurkat細(xì)胞系中一部分CD34+細(xì)胞向CD34-細(xì)胞分化，而另一部分則維持CD34的表達(dá)，這提示Jurkat中的CD34+細(xì)胞具有干細(xì)胞特點(diǎn)，即存在自我復(fù)制、有限分化和無(wú)限增殖的能力，但并不意味著其下游分化的CD34-細(xì)胞不具有無(wú)限增殖能力和致瘤能力。CD34+向CD34-細(xì)胞的轉(zhuǎn)化是一個(gè)CD34的表達(dá)逐漸減弱的過(guò)程。Ju