PHI對(duì)淋巴母細(xì)胞性白血病Molt-4細(xì)胞株組蛋白調(diào)控的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、【目的】研究PHI在體外對(duì)正常人單個(gè)核細(xì)胞和淋巴母細(xì)胞性白血病Molt一4細(xì)胞株的作用，觀察PHI對(duì)白血病細(xì)胞表觀遺傳學(xué)的影響，并初步探討其可能的機(jī)制。 【方法】臺(tái)盼藍(lán)拒染直接計(jì)數(shù)法、原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)法(TUNNEL法)觀察PHI對(duì)正常人單個(gè)核細(xì)胞增殖及凋亡的影響，采用MTT法、克隆抑制試驗(yàn)觀察PHI對(duì)Molt-4細(xì)胞增殖的影響；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)觀察PHI誘導(dǎo)Molt-4細(xì)胞凋亡和對(duì)細(xì)胞周期的影響；用蛋白免疫印跡法(Western

2、Blotting)觀察在PHI作用下Molt一4細(xì)胞的凋亡相關(guān)蛋白Bcl一2、Caspase-9、Caspase一8、Caspase一3、凋亡底物PRAP表達(dá)的變化；用蛋白免疫印跡法(WesternBlotting)檢測(cè)PHI對(duì)Molt一4細(xì)胞的組蛋白H3、H4乙?；癄顟B(tài)和H3K4、H3K9甲基化狀態(tài)變化。 【結(jié)果】PHI對(duì)正常人單個(gè)核細(xì)胞抑制作用不明顯，未見細(xì)胞凋亡。PHI抑制Molt一4細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)Molt一4細(xì)胞凋亡，阻

3、滯Molt-4細(xì)胞的細(xì)胞周期于G0／G1期，呈時(shí)效和量效變化；隨著PHI作用時(shí)間和濃度的增加，線粒體膜蛋白Bcl一2，caspase一9及下游caspase一3，凋亡底物PRAP表達(dá)下降，而caspase一8未見明顯變化；PHI能明顯抑制組蛋白去乙酰化酶([{ADC)的活性，且組蛋白乙?；窹300表達(dá)增加，能顯著提高組蛋白H3、H4乙?；剑M蛋白H3K4甲基化增加而H3K9甲基化水平明顯下降。 【結(jié)論】PHI對(duì)正常人的單個(gè)

4、核細(xì)胞的作用較小，卻能抑制Molt-4細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡，阻滯Molt-4細(xì)胞的細(xì)胞周期于G0／G1期。提示PHI是一種安全的白血病化療藥物。線粒體凋亡途徑抗凋亡蛋白Bcl一2的裂解、凋亡蛋白Caspase一9的活化，而細(xì)胞死亡受體途徑的Caspase一8未見變化，線粒體凋亡途徑可能是其作用的主要機(jī)制，凋亡的受體一配體途徑作用較小。PHI能抑制HADC的活性，提高組蛋白乙?；傅谋磉_(dá)，進(jìn)而提高組蛋白乙?；乃剑种婆c異染色體有