OVCA1基因?qū)θ寺殉舶┘?xì)胞系A(chǔ)2780細(xì)胞周期抑制的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究OVCA1基因?qū)θ寺殉舶┘?xì)胞系A(chǔ)2780細(xì)胞內(nèi)cyclinD1、p16、NF-κB的調(diào)節(jié)作用，探討其是否通過(guò)調(diào)節(jié)cyclinD1的表達(dá)水平，發(fā)揮調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用，以及OVCA1基因通過(guò)那些直接或間接作用引起cyclinD1表達(dá)水平的變化，從而揭示OVCA1基因?qū)2780細(xì)胞的細(xì)胞周期抑制的分子機(jī)制。 方法：選用A2780細(xì)胞(人卵巢癌細(xì)胞系A(chǔ)2780)與A2780-OVCA1細(xì)胞(單克隆的穩(wěn)定表達(dá)

2、OVCA1基因的人卵巢癌細(xì)胞株A2780)進(jìn)行體外培養(yǎng)，采用成集落的細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)檢測(cè)OVCA1基因?qū)2780細(xì)胞增殖活性的影響；RT-PCR技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)cyclinD1、p16的mRNA表達(dá)水平；免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)cyclinD1、p16、NF-κB的蛋白表達(dá)水平，對(duì)細(xì)胞內(nèi)cyclinD1、p16的蛋白表達(dá)同時(shí)采用免疫熒光技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。 結(jié)果：1.A2780-OVCA1細(xì)胞集落形成百分率為58.5040士3.8799

3、﹪，A2780細(xì)胞集落形成百分率為78.8660士7.4908﹪，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。2.A2780-OVCA1細(xì)胞內(nèi)cyclinD1的mRNA相對(duì)含量為0.9752±0.1055，A2780細(xì)胞內(nèi)cyclinD1的mRNA相對(duì)含量為1.4154士0.1149，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；A2780-OVCA1細(xì)胞內(nèi)p16的mRNA相對(duì)含量為0.3562士0.0042，A2780細(xì)胞內(nèi)p16的mRNA相對(duì)含量為0.1

4、865士0.0111，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。3.A2780-OVCA1細(xì)胞中cylinD1的免疫細(xì)胞化學(xué)染色強(qiáng)度與免疫熒光染色強(qiáng)度均弱于A2780細(xì)胞，p16的兩種染色強(qiáng)度均強(qiáng)于A2780細(xì)胞，通過(guò)平均光密度值比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。4.cyclinD1與p16的表達(dá)在mRNA水平與蛋白水平均不具有相關(guān)性(p＞0.05)。5.OVCA1基因在mRNA水平及蛋白水平對(duì)A2780細(xì)胞內(nèi)cyclinD1的抑制率無(wú)

5、統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；OVCA1基因?qū)16的上調(diào)率在mRNA水平為91.3944士2.4942﹪，蛋白水平為38.9152士2.8227﹪，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。6.兩種細(xì)胞內(nèi)NF-κB蛋白的表達(dá)總量、胞漿表達(dá)量、胞核表達(dá)量均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。 結(jié)論：1.OVCA1基因?qū)θ寺殉舶┘?xì)胞系A(chǔ)2780細(xì)胞的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用。2.抑制cyclinD1的mRNA表達(dá)是OVCA1基因抑制腫瘤細(xì)胞增殖的