肌醇六磷酸對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞系HT-29細(xì)胞周期的影響及機(jī)制探討.pdf

1、目的：用不同濃度的IP6作用于人結(jié)腸癌細(xì)胞系HT-29，觀察IP6對(duì)癌細(xì)胞周期的影響并進(jìn)行作用機(jī)制探討，為研究IP6的抗癌機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。 方法：將不同濃度的IP6(0mM，1.8mM,3.3mM,5.0mM，8.0mM,13.0mM，)作用于HT-29細(xì)胞，分別進(jìn)行如下研究：1、應(yīng)用四甲基偶氮唑藍(lán)實(shí)驗(yàn)(MTT法)分別觀察IP6持續(xù)作用與間斷作用對(duì)癌細(xì)胞增殖的影響；2、流式細(xì)胞儀檢測不同濃度lP6作用的HT-29細(xì)胞的細(xì)胞周期

2、變化；3、RT-PCR法檢測IP6對(duì)HT-29細(xì)胞內(nèi)cyclinD1、CDK4mRNA表達(dá)的影響；4、應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測IP6對(duì)HT-29細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞增殖相關(guān)基因PCNA、突變型p53蛋白、細(xì)胞周期抑制蛋白p21表達(dá)的影響 結(jié)果：1、不同濃度IP6持續(xù)作用對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29的生長抑制作用結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，各濃度組OD值隨IP6濃度的增加、作用時(shí)間的延長均顯著降低(P＜0.05)，顯示IP6持續(xù)作用對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞株的

3、生長具有抑制作用，且具有濃度依賴和時(shí)間依賴關(guān)系；不同濃度IP6間斷作用對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞系HT-29生長的增殖抑制作用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在不同作用時(shí)間5種濃度IP6作用組的OD值普遍小于對(duì)照組(P＜0.05)，但僅在每2天作用24小時(shí)的結(jié)果顯示出各IP6作用組之間的濃度依賴關(guān)系。2、流式細(xì)胞儀檢測不同濃度IP6作用對(duì)HT-29細(xì)胞周期的影響結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，各IP6濃度組在48小時(shí)、72小時(shí)兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，隨著IP6濃度的增高、作用時(shí)間的延

4、長，G0-G1期細(xì)胞明顯增加(P＜0.01)，而s期、G2/M期細(xì)胞明顯降低(P＜0.01)，表現(xiàn)出濃度、時(shí)間依賴關(guān)系。3、RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，各濃度組均使cyclinD1、CDK4mRNA表達(dá)不同程度降低。4、免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，各IP6濃度組均能抑制突變型p53蛋白的表達(dá)(P＜0.05)，上調(diào)p21蛋白的表達(dá)(P＜0.05)。各IP6作用組均表現(xiàn)出HT-29細(xì)胞PCNA的表達(dá)降低(P＜0.05

5、)，作用強(qiáng)弱不同，其中3.3～5.0mM濃度組的OD值隨時(shí)間延長而降低(P＜0.05)。 結(jié)論：IP6對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞系HT-29細(xì)胞周期有G1期阻滯作用，阻止細(xì)胞由G1-S期的轉(zhuǎn)化，并具有濃度、時(shí)間依賴關(guān)系。其影響細(xì)胞周期的作用機(jī)制可能為：IP6降低突變型p53蛋白并促進(jìn)野生型p53的表達(dá)，刺激細(xì)胞周期抑制蛋白p21的表達(dá)；p21競爭性結(jié)合cyclinD1/CDK4，抑制CDK4活性，使E2F活性降低，抑制DNA的合成，從而阻止