詹森桿菌紫色桿菌素優(yōu)化鑒定及其對結(jié)腸癌細胞HT-29的作用.pdf

1、詹森桿菌紫色桿菌素優(yōu)化鑒定及其對結(jié)腸癌細胞詹森桿菌紫色桿菌素優(yōu)化鑒定及其對結(jié)腸癌細胞HT29的作用的作用OptimizationIdentificationofViolaceinbyJanthinobacteriumlividumItsEffectontheColonCancerCellHT29學(xué)科專業(yè)：食品科學(xué)研究生：許嫚指導(dǎo)教師：韓燁副教授天津大學(xué)化工學(xué)院二零一五年五月摘要摘要紫色桿菌素(violacein，Vio)是由微生物產(chǎn)生的

2、一種次級代謝產(chǎn)物，屬于吲哚衍生物，由兩個色氨酸分子氧化縮合而成。具有抗原生動物、抗菌、抗病毒、抗腫瘤等多種生物活性。本研究以詹森桿菌（JanthinobacteriumlividumZSJ）為出發(fā)菌株，對其發(fā)酵條件及結(jié)腸癌細胞株HT29的作用進行了研究。實驗內(nèi)容如下：1.對詹森桿菌ZSJ發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進行優(yōu)化。結(jié)果表明，培養(yǎng)基組分為：麥芽糖1.25gL，胰蛋白胨9.5gL，牛肉浸膏2.5gL，色氨酸1.25gL；發(fā)酵條件為：初始p

3、H值6，接種量7%，裝液量50mL250mL時，紫色桿菌素產(chǎn)量最高，為2.87gL，較原產(chǎn)量2.13gL增長了34.7%。2.采用16SrDNA法對分離得到的菌株進行鑒定，確定出發(fā)菌株與JanthinobacteriumlividumBR01同源性為99%，屬于詹森桿菌屬。采用高效液相色譜、紫外可見光譜、核磁共振氫譜等方法對提取到的藍紫色素進行分離鑒定。結(jié)果表明，該藍紫色素由脫氧紫色桿菌素和紫色桿菌素兩部分組成，比例約為1：9，可見光下

4、最大吸收波長分別為565nm和584nm。3.對紫色桿菌素的粗提物進行光、酸堿、熱、溶解性及顏色和金屬離子對色素穩(wěn)定性進行研究研究。結(jié)果表明，該藍紫色素?zé)岱€(wěn)定性良好；對酸堿穩(wěn)定性較好，pH值超過12以后出現(xiàn)明顯的顏色及吸光值變化；對光照較為敏感，直射光下呈現(xiàn)褪色現(xiàn)象。4.研究紫色桿菌素對HT29的作用。結(jié)果表明，紫色桿菌素對細胞生長抑制作用呈時間、劑量依賴性，與同劑量5氟尿嘧啶比較，具有更明顯的抑制效果，最高抑制率達90%以上；光鏡及電

5、鏡均顯示出紫色桿菌素作用后的細胞呈現(xiàn)出空泡結(jié)構(gòu)，濃度越大空泡結(jié)構(gòu)越多；凋亡現(xiàn)象發(fā)生在晚期，與藥物濃度和作用時間呈正相關(guān)。5.采用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究紫色桿菌素作用后HT29中差異蛋白情況。結(jié)果表明，紫色桿菌素高劑量組作用后差異蛋白數(shù)為492個，低劑量組為112個，5氟尿嘧啶組為336個。差異蛋白主要富集在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及翻譯過程，分布在細胞質(zhì)、離子體膜及核酸上，主要富集在與結(jié)合功能相關(guān)的蛋白上。差異蛋白共參與了50條信號通路，最主要的通路為轉(zhuǎn)錄