運(yùn)動(dòng)和PDGF-AB對(duì)缺血心肌纖維化及FoxO3a通路參與調(diào)控心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺血重灌注損傷的研究.pdf

1、目的:(1)探討心肌梗死早期進(jìn)行運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練聯(lián)合使用 PDGF-AB進(jìn)行促血管新生治療對(duì)缺血心肌纖維化及巨噬細(xì)胞分布的影響;
　　(2)探討B(tài)DNF及低氧對(duì)年青和年老CMECs粘附單核細(xì)胞的功能影響;(3)闡明FoxO3a信號(hào)通路對(duì)心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞(CEMCs)在缺血/重灌注損傷(IR)的影響,以及構(gòu)建FoxO3a的突變載體。
　　方法:(1)使用Masson’s Trichrome染色和CD68免疫組化,對(duì)使用PDGF-AB

2、治療組、PBS+運(yùn)動(dòng)(跑臺(tái)運(yùn)動(dòng))處理組、PDGF-AB+運(yùn)動(dòng)處理組和PBS組的心梗心臟的纖維化及巨噬細(xì)胞分別對(duì)比分析;
　　(2)使用BDNF預(yù)處理年青與年老CMECs6 h和12 h;另在低氧預(yù)處理CMECs6 h后加入外周血單核細(xì)胞,并將其在正常氧及低氧條件下培養(yǎng),并于45min,2 h,3 h分別檢測(cè)其對(duì)單核細(xì)胞的粘附作用。
　　(3)使用體外培養(yǎng) CMECs的缺血/再灌注模型,對(duì) FoxO3a通路是否調(diào)控細(xì)胞周期、細(xì)

3、胞凋亡及細(xì)胞活性進(jìn)行研究;利用 pEGFP-N1載體構(gòu)建FoxO3a的突變體。
　　結(jié)果:(I)運(yùn)動(dòng)及PDGF-AB促血管新生治療,對(duì)缺血心肌纖維化及巨噬細(xì)胞研究部分:
　　①PDGF-AB組及 PDGF-AB+運(yùn)動(dòng)組的心臟橫斷面膠原面積顯著小于PBS對(duì)照組(p<0.05), PDGF-AB+運(yùn)動(dòng)組的心臟橫斷面膠原面積顯著小于 PBS+運(yùn)動(dòng)組(p<0.05);
　?、赑BS+運(yùn)動(dòng)組,PDGF-AB組,PDGF-AB+運(yùn)

4、動(dòng)組的心臟梗死區(qū)膠原面積顯著小于 PBS對(duì)照組(p<0.05);
　?、跴BS+運(yùn)動(dòng)組,PDGF-AB組, PDGF-AB+運(yùn)動(dòng)組的血管周邊膠原面積分別與 PBS對(duì)照組比較沒(méi)有明顯差異(p>0.05);
　　④PBS+運(yùn)動(dòng)組,PDGF-AB組,PDGF-AB+運(yùn)動(dòng)組,心臟梗死區(qū)的M1型巨噬細(xì)胞數(shù)分別與 PBS對(duì)照組比較,沒(méi)有明顯差異(p>0.05)。
　　(II)低氧及BDNF處理CMECs對(duì)外周血單核細(xì)胞粘附作用部分

5、:
　?、倌昵嗯c年老CMECs在正常氧狀態(tài),其粘附外周血單核細(xì)胞數(shù)沒(méi)有明顯差異;
　　②在低氧(5％)培養(yǎng)6 h,年老CMECs粘附外周血單核細(xì)胞數(shù)明顯高于年輕CMECs;
　?、勰昵郈MECs經(jīng)過(guò)BDNF處理各組別,其粘附外周血單核細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組比較沒(méi)有太大差異;
　　④年老CMECs經(jīng)過(guò)BDNF處理各組別,其粘附外周血單核細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組比較沒(méi)有太大差異。
　　(III)CEMCs在缺血/重灌注損傷(IR

6、)研究部分:
　?、僭谂c對(duì)照組的細(xì)胞活性(設(shè)定100%活性)相比較,得出在經(jīng)過(guò)IR6 h, IR12 h, IR24 h處理后的CMECs活性明顯降低;
　?、诋?dāng)使用Akt的激活劑和抑制劑處理CMECs時(shí)發(fā)現(xiàn)了Akt能通過(guò)對(duì) FoxO3a的磷酸化作用下調(diào)控FoxO3a通路的活性;當(dāng) CMECs受到I/R損傷時(shí),FoxO3a被明顯激活,伴隨著Akt活性的降低;
　?、跜MECs在經(jīng)過(guò)I/R處理后,通過(guò)p27Kip1的上調(diào)

7、作用導(dǎo)致了細(xì)胞的細(xì)胞周期停留在G1期,并且停留在G1期的細(xì)胞量顯著增多,同時(shí)明顯激活caspase-3的活性;
　?、墚?dāng)用Akt激活劑 IGF-1處理 CMECs時(shí),能抑制 FoxO3a通道的活性,明顯阻礙了由 I/R誘導(dǎo)激活的p27Kip1和caspase-3的活性提高。
　?、菟鶚?gòu)建的pEGFP-FoxO3a-TSS的突變體重組子基因序列與目的基因完全匹配,并能在293T細(xì)胞中表達(dá)。
　　結(jié)論:(1)運(yùn)動(dòng)、PDGF

8、-AB治療及運(yùn)動(dòng)+PDGF-AB治療均能顯著減少缺血心臟纖維化,運(yùn)動(dòng)+PDGF-AB治療的效果最佳;
　　(2)在低氧狀態(tài)下,年老CMECs粘附外周血單核細(xì)胞的能力高于年青CMECs;
　　(3)BDNF對(duì)年老CMECs、年青CMECs進(jìn)行處理并不能提高其粘附外周血單核細(xì)胞的能力;
　　(4)FoxO3a通路通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡進(jìn)而在CMEC缺血/重灌注損傷過(guò)程中發(fā)揮重要功能;
　　(5)成功構(gòu)建了能在29