L-選擇素及其配體在HepG2細(xì)胞中的表達(dá)及其介導(dǎo)腫瘤轉(zhuǎn)移作用的研究.pdf

1、目的：
　　1.檢測(cè)L-選擇素、配體SLeX及配體合成酶FUT7在正常肝細(xì)胞株L-02及肝癌細(xì)胞株HepG2中的表達(dá)，分析表達(dá)變化與肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。
　　2.探討低分子肝素對(duì)L-選擇素、SLeX、FUT7表達(dá)的影響及其對(duì)HepG2細(xì)胞株增殖、黏附和遷移的影響。
　　3.研究分別抑制L-選擇素與配體SLeX的表達(dá)后HepG2細(xì)胞遷移率及黏附率的變化。
　　方法：
　　1.RT-PCR、Western-b

2、lot、流式細(xì)胞技術(shù)和免疫細(xì)胞爬片化學(xué)染色方法分別檢測(cè)L-選擇素、SLeX、FUT7在L-02正常肝細(xì)胞株和HepG2肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)。
　　2.FN蛋白黏附實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)觀察HepG2細(xì)胞株的異質(zhì)黏附性和遷移能力。
　　3.不同濃度低分子肝素作用于 HepG2細(xì)胞株，四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)其細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率，RT-PCR法、流式細(xì)胞技術(shù)分別檢測(cè) L-選擇素、SLeX、FUT7表達(dá)量的變化。
　　

3、4.分別用低分子肝素抑制L-選擇素，用抗SLeX抗體封閉HepG2細(xì)胞表面SLeX抗原后,接種于24孔Transwell小室檢測(cè)HepG2細(xì)胞遷移率的變化，F(xiàn)N蛋白粘附實(shí)驗(yàn)觀察HepG2細(xì)胞株的異質(zhì)黏附性的變化。
　　結(jié)果：
　　1.從RNA水平，L-選擇素、SLeX、FUT7在正常肝細(xì)胞株L-02中均不表達(dá)，而在肝癌HepG2細(xì)胞株中都有表達(dá)；從蛋白水平，L-選擇素在HepG2細(xì)胞表達(dá)率為（10.09±0.5）％，West

4、ern-blot及免疫化學(xué)染色均顯示 SLeX在 HepG2細(xì)胞高表達(dá)而在L-02細(xì)胞則無(wú)表達(dá)。
　　2.低分子肝素對(duì)HepG2細(xì)胞株表達(dá)的L-選擇素及FUT7有抑制作用，而對(duì)SLeX的表達(dá)沒(méi)有影響，四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法測(cè)低分子肝素對(duì) HepG2細(xì)胞的生長(zhǎng)有抑制作用。
　　3.分別減少L-選擇素及SLeX的表達(dá)量可以使HepG2細(xì)胞穿膜數(shù)減少（P<0.01）；FN黏附細(xì)胞數(shù)減少（P<0.01）。
　　結(jié)論：