抗腫瘤新藥德氮吡格的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、本課題研究的德氮吡格(Tetrazanbigen，TNBG)是自主創(chuàng)新設(shè)計(jì)合成的含2-苯基萘三環(huán)共平面的氮雜甾烷類化合物。經(jīng)體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)證明，TNBG具有良好的抗腫瘤作用，能顯著延長(zhǎng)荷瘤動(dòng)物的生存期，且無(wú)交叉耐藥性。其作用機(jī)制主要是干擾腫瘤細(xì)胞脂代謝引起腫瘤細(xì)胞內(nèi)大量脂質(zhì)聚積，影響其功能，達(dá)到抗腫瘤的目的。 TNBG的抗腫瘤作用機(jī)制與目前臨床上常用的細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物截然不同，在深入研究作用機(jī)制的基礎(chǔ)上，研究藥物代謝動(dòng)力學(xué)，這對(duì)

2、于TNBG的研發(fā)具有重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。 藥物代謝動(dòng)力學(xué)(Pharmacokinetics，PK)是應(yīng)用動(dòng)力學(xué)原理與數(shù)學(xué)處理方法，定量描述藥物在體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，即研究通過(guò)各種途徑進(jìn)入生物體藥物的吸收(absorption)、分布(distribution)、代謝(metabolism)和排泄(excretion)，即ADME過(guò)程，并探討藥物在體內(nèi)發(fā)生的代謝或者生物轉(zhuǎn)化途徑。藥物動(dòng)力學(xué)的核心是闡明體內(nèi)藥物的濃度隨時(shí)間變化

3、的動(dòng)態(tài)過(guò)程，藥物代謝學(xué)是探討藥物分子化學(xué)結(jié)構(gòu)在體內(nèi)發(fā)生的生物轉(zhuǎn)化，了解藥物的代謝圖譜，這對(duì)于指導(dǎo)開(kāi)發(fā)新藥、臨床合理安全用藥具有十分重要的意義。 本文的目標(biāo)是研究TNBG的體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)過(guò)程及其體外代謝情況，開(kāi)展的主要工作有以下四個(gè)方面： 1．建立了HPLC測(cè)定TNBG含量的方法。選用C<,18>柱，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)260nm，流動(dòng)相甲醇：0.1％三乙胺水溶液(pH6.5)，體積比90:10，流速1.0mL·min<'-1>，

4、柱溫30℃。該方法簡(jiǎn)便易行、穩(wěn)定性好、重現(xiàn)性高。 2．建立了TNBG在生物樣品中的分離與測(cè)定方法。色譜條件與TNBG含量測(cè)定方法一樣。血漿、肝、肺、腎、腦、心等組織的生物樣品都以甲醇作為除蛋白試劑，經(jīng)C<,18>固相萃取純化，用RP-HPLC法對(duì)生物樣品進(jìn)行測(cè)定。通過(guò)預(yù)處理及HPLC條件優(yōu)化，所有內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)TNBG測(cè)定均無(wú)干擾。各組織中的TNBG濃度在2-20μg·mL<'-1>范圍內(nèi)均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(r>0.99)，樣品

5、平均回收率大于85％，RSD小于6％。日內(nèi)精密度RSD小于10％，日間精密度RSD小于9％。 3．研究了TNBG的藥代動(dòng)力學(xué)。采用建立的TNBG生物樣品測(cè)定方法進(jìn)行了小鼠藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)，探討了TNBG在小鼠體內(nèi)動(dòng)態(tài)變化的規(guī)律及其特點(diǎn)。 以靜脈給藥方式進(jìn)行的吸收動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，TNBG在小鼠體內(nèi)的動(dòng)力學(xué)符合二室模型。單次10、20、30mg·kg<'-1>給藥后，三個(gè)劑量組的濃度．時(shí)間曲線下面積(AUC<,(0-t)>

6、)分別為：5.874±1.65、24.757±7.632和34.575±1.599 μg·mL<'-1>·h；分布半衰期t<,1/2>(α)>分別為：0.086±0.025、0.073±0.029和0.061±0.004 h；消除半衰期t<,1/2(β)>分別為：5.752±1.757、8.488±1.848、6.821±0.636 h。 在分布實(shí)驗(yàn)中，采用HPLC法測(cè)定單次TNBG(10mg·kg<'-1>)靜脈注射給藥后小鼠

7、各組織中原形藥物在5個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)的濃度，其結(jié)果表明TNBG在體內(nèi)分布較廣泛而迅速，其中以肺分布最多，依次為脾>腎>肝>腦>心。 在排泄實(shí)驗(yàn)中，小鼠尾靜脈注射TNBG(10mg·kg<'-1>)后，用HPLC法測(cè)定表明，原形藥物的排泄主要通過(guò)糞便排泄，只有少量通過(guò)膽汁排泄；用LC/MS法測(cè)定發(fā)現(xiàn)，TNBG在小鼠尿液、糞便和膽汁中的代謝物為含氧的代謝物，其中尿液可見(jiàn)原形藥物TN-BG的[M+1]<'+>(m/z289)峰，以及[M+

8、14]<'+>(m/z 302)，[M+30]<',+>(m/z 318)，[M+33]<'+>(m/z321)，[M+45]<'+>(m/z 333)代謝的峰。膽汁中可見(jiàn)[M+14]<'+>(m/z 302)，[M+45]<'+>(m/z 333)代謝的峰。糞便中可見(jiàn)原形藥物TNBG的[M+1]<'+>(m/z 289)，以及[M+14]<'+>(m/z 302)代謝的峰。根據(jù)TNBG藥物結(jié)構(gòu)推測(cè)，這4個(gè)代謝產(chǎn)物主要為加氧和(或)羥基

9、化代謝產(chǎn)物，但加氧及其羥基化位置有待進(jìn)一步研究確定。 另外，本實(shí)驗(yàn)采用間接方法，小鼠尾靜脈注射TNBG(10 mg·kg<'-1>)6h后，采血，分離血漿，用平衡透析法測(cè)得FNBG的血漿蛋白結(jié)合率為88％以上。這對(duì)于指導(dǎo)臨床用藥配伍和設(shè)計(jì)最適給藥方案具有重要的理論意義和實(shí)用價(jià)值。 4．進(jìn)行了TNBG的體外代謝實(shí)驗(yàn)研究。 根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié)合TNBG結(jié)構(gòu)特征，主要選擇了CYP2C9、CYP2D6和CYP3A4三種

10、代謝酶進(jìn)行考察，用大鼠肝微粒體體外孵育實(shí)驗(yàn)方法，采用LC/MS測(cè)定，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，磺胺苯吡唑、奎尼丁、酮康唑?qū)NBG的代謝都有不同程度的抑制作用，由此表明CYP2C9、CYP2D6和CYP3A4三種代謝酶都可能參與了TNBG的代謝，具體的代謝產(chǎn)物及其代謝機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。 綜上所述，本文進(jìn)行了TNBG的小鼠藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)，探討了TNBG在小鼠體內(nèi)動(dòng)態(tài)變化的規(guī)律及其特點(diǎn)，確定了CYP450在TNBG代謝中的作用，發(fā)現(xiàn)CY