蠟蚧霉對(duì)蚧蟲(chóng)的致病力及組織病理學(xué)研究.pdf

1、蚧蟲(chóng)種類繁多，分布極廣，大多數(shù)種類是農(nóng)林、果木和花卉的重要害蟲(chóng)。它們主要以刺吸式口器吸取植物的汁液為食，對(duì)寄主植物造成危害。蚧蟲(chóng)表面具有多種蠟腺，分泌蠟質(zhì)，覆蓋在蟲(chóng)體表面，起保護(hù)作用，使得化學(xué)防治頗為困難。應(yīng)用昆蟲(chóng)病原真菌進(jìn)行生物防治是實(shí)現(xiàn)蚧蟲(chóng)可持續(xù)控制的重要途徑，蠟蚧霉Lecanicilliurnlecanii（Zimmermann.）Gams& Zare是蚧蟲(chóng)的一種重要的病原真菌。本文選擇一株對(duì)蚧蟲(chóng)具有高致病力的蠟蚧霉菌株No.V3

2、.4504（最初從蚧蟲(chóng)上分離），研究蠟蚧霉對(duì)蚧蟲(chóng)的致病力及蚧蟲(chóng)受蠟蚧霉感染的組織病理學(xué)變化，為利用病原真菌防治蚧蟲(chóng)提供理論依據(jù)和實(shí)踐指導(dǎo)。內(nèi)容包括(1)蠟蚧霉菌株No.V3.4504在7種不同基質(zhì)上繼代培養(yǎng)，對(duì)其菌落特性、胞外蛋白酶和幾丁質(zhì)酶活性及對(duì)蚧蟲(chóng)致病力的影響;(2)蠟蚧霉在沙里院褐球蚧和日本龜蠟蚧表皮培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況，胞外脂肪酶活力的變化趨勢(shì)以及兩種蚧蟲(chóng)表皮脂肪的含量;(3)蠟蚧霉侵染朝鮮毛球蚧的組織病理變化。結(jié)果如下:

3、>　　1.蠟蚧霉菌株No.V3.4504在7種培養(yǎng)基上分別繼代培養(yǎng)多代，通過(guò)觀察菌落形態(tài)特征、測(cè)定生長(zhǎng)速率、產(chǎn)孢量、胞外蛋白酶和幾丁質(zhì)酶活性及對(duì)蚧蟲(chóng)的致死率，發(fā)現(xiàn)在PDA培養(yǎng)基(A)上，菌落生長(zhǎng)速率最快，但產(chǎn)孢量最低，胞外蛋白酶和幾丁質(zhì)酶的活性均呈逐代下降趨勢(shì)，對(duì)兩種蚧蟲(chóng)致死率也最低;增加蛋白胨(B)對(duì)改善菌種致病力沒(méi)有明顯效果;在增加蚧蟲(chóng)尸體的D、E、F培養(yǎng)基上，菌落生長(zhǎng)速率雖然較慢，但產(chǎn)孢量分別上升為8.83×106-9.13×10

4、6孢子/cm2。蛋白酶和幾丁質(zhì)酶活性平均分別達(dá)到2.13-2.16U/g和1.01-1.03 U/g，對(duì)兩種蚧蟲(chóng)的致死率分別在55％-58％和39％-42％;在活蚧蟲(chóng)上連續(xù)培養(yǎng)3代，蛋白酶和幾丁質(zhì)酶活性最高，為2.92-3.08U/g和1.42-1.45 U/g，是PDA培養(yǎng)基上的1.6倍。對(duì)兩種蚧蟲(chóng)的致死率也最高，分別達(dá)到71.30％和58.89％;蛋白酶和幾丁質(zhì)酶的活性與蚧蟲(chóng)死亡率呈正直線相關(guān)關(guān)系。
　　2.用蠟蚧霉菌株No.

5、V3.4504的分生孢子懸浮液7×107孢子/mL分別接種到沙里院褐球蚧及日本龜蠟蚧的表皮培養(yǎng)基上，觀察培養(yǎng)基上菌株的生長(zhǎng)狀況，同時(shí)測(cè)定脂肪酶活力的變化及表皮脂肪含量。發(fā)現(xiàn)在沙里院褐球蚧表皮培養(yǎng)基上菌株No.V3.4504的菌絲生長(zhǎng)旺盛;菌株在沙里院褐球蚧表皮培養(yǎng)基上，脂肪酶活性在第6d為最高峰，活性為0.117 U/g，在日本龜蠟蚧上是第7d達(dá)到最高峰，活性為0.442U/g;菌株在兩種蚧蟲(chóng)表皮培養(yǎng)基上脂肪酶活性差異較大，日本龜蠟蚧表

6、皮培養(yǎng)基上的脂肪酶活性比沙里院褐球蚧上的高3倍多;測(cè)定兩種蚧蟲(chóng)表皮脂肪的含量，發(fā)現(xiàn)在日本龜蠟蚧表皮的脂肪含量是沙里院褐球蚧的2倍多，表皮脂肪的含量與脂肪酶的活性高低成正比。
　　3.用蠟蚧霉菌株No.V3.4504孢子懸浮液接種朝鮮毛球蚧，采用光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡觀察研究蠟蚧霉對(duì)蚧蟲(chóng)的侵染過(guò)程和致病途徑，發(fā)現(xiàn)蠟蚧霉主要通過(guò)穿透該蚧蟲(chóng)體壁或從裂縫處直接侵染蟲(chóng)體，其中口器和足的基部、體緣區(qū)、氣門(mén)、陰門(mén)區(qū)以及肛板周圍是蟲(chóng)體最易被侵染的

7、部位，菌絲可以穿透蟲(chóng)體背面的蠟層入侵。蠟蚧霉對(duì)朝鮮毛球蚧的侵染過(guò)程如下:接菌后24 h，粘附于蚧蟲(chóng)體壁的分生孢子，萌發(fā)形成芽管，芽管進(jìn)一步延伸形成菌絲;48h后，菌絲前端長(zhǎng)出侵染釘穿透體表，同時(shí)沿寄主體壁生長(zhǎng)，側(cè)向分枝或橫向生長(zhǎng)不斷的深入蚧蟲(chóng)體壁。菌絲穿透表皮層后即進(jìn)入真皮層，真皮層內(nèi)含有大量的腺體細(xì)胞，菌絲入侵腺體細(xì)胞可以被觀察到，最終蚧蟲(chóng)體壁被穿透，同時(shí)菌絲在蟲(chóng)體上不斷的增長(zhǎng)繁殖，肛門(mén)周圍被大量的菌絲及孢子覆蓋;接菌72 h后，許多

8、菌絲已經(jīng)完全侵入蟲(chóng)體，蟲(chóng)體腹面著生大量菌絲和孢子，背面菌絲突破蠟層，整個(gè)蟲(chóng)體被一層厚厚的菌絲層覆蓋。觀察蟲(chóng)體內(nèi)部組織病變發(fā)現(xiàn)，菌絲穿透體壁后侵入血腔。在血腔內(nèi)菌絲以芽生孢子的形態(tài)入侵血細(xì)胞。菌絲在血細(xì)胞里大量的繁殖，使血細(xì)胞出現(xiàn)空泡;菌絲侵肌肉纖維，肌肉纖維疏松且與周圍組織分離;消化道被破壞，腸道和濾室都出現(xiàn)芽生孢子，內(nèi)部都出現(xiàn)空洞;神經(jīng)節(jié)內(nèi)部也有病菌侵入。最后，蟲(chóng)體內(nèi)充滿大量的菌絲和孢子，內(nèi)部器官被消耗分解，蟲(chóng)體萎縮，明顯發(fā)黑干煸，死