蠟蚧菌蛋白酶的純化及酶學(xué)性質(zhì)初步研究.pdf

1、福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文蠟蚧菌蛋白酶的純化及酶學(xué)性質(zhì)初步研究姓名：盧招雄申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物工程指導(dǎo)教師：邱君志;謝陽(yáng)軍20090401福建農(nóng)林大學(xué)生物工程專業(yè)碩士學(xué)位論文P r e l i m i n a r yS t u d i e s o n P u r i f i c a t i o na n d C h a r a c t e r i z a t i o n o f P r o t e a s eP r o d u c

2、 e d f r o m L e c a n i c i n i u m l e c a n i iA b s t r a c t ：L e c a n i c i l l i u ml e c a n i i ，w i t ha w i d eg e o g r a p h i c a ld i s t r i b u t i o na n d b r o a d h o s tr a n g e ，i so fc o n s i d

3、 e r a b l e i m p o r t a n c e i n a g r i c u l t u r e a s a n e n t o m o p a t h o g e n i cf u n g u s o f i n s e c t a n dn e m a t o d e s ．L ．1 e c a n i iw a se v a l u a t e d a sp r o t e a s e p r o d u c

4、e r a n d f u n g a I p r o t e a s ep l a y e d a l li m p o r t a n t r o l ei nb i o l o g i c a lc o n t r o lo f p e s t s ．L e c a n i c i l l i u mF J V L 一1 2 s h o w e ds o m e i n s e c t i c i d a la c t i v i

5、 t y o nt h et o b a c o w h i t e f l y , a n d i t w a si d e n t i f i c a t e d a s L ．1 e c a n i i b a s e do n n r - L S Us e q u e n c e s ．T h e m e d i u m o p t i m i z a t i o n f o r p r o t e a s e p r o d

6、u c t i o n b y F J V L - 1 2 b a s e d o no n e —f a c t o r - a t —a —t i m ea n do r t h o g o n a la r r a yd e s i g nm e t h o d sw a s d e s c r i b e di nt h i s d i s s e r t a t i o n ．T h eo n e - f a c t o r

7、- a t —a - t i m em e t h o dw a su s e d t o s t u d yt h e e f f e c t so fc a r b o n s o u r c e s ，n i t r o g e ns o u r c e s ，m e t a l i o n sa n d v i t a m i n so np r o t e a s e p r o d u c t i o n ．A m o n

8、g v a r i o u sc a n d i d a t e se m p l o y e d ，m a l t o s e ，p e p t o n e ，m a g n e s i u m a n d V a 6 w e r e t h e m o s t s u i t a b l e f o r p r o t e a s e p r o d u c t i o n ，r e s p e c t i v e l y ．S u

9、 b s e q u e n t l y , o p t i m a lm e d i u mf o rt h ec o m b i n a t i o no fc a r b o ns o u r c e s ，n i t r o g e ns o u r c e s ，v i t a m i n s a n d m i n e r a l S O u r C e S ，a s w e l l a s s u b m e r g e

10、d c u l t u r e c o n d i t i o n s w e r ei n v e s t i g a t e du s i n ga no r t h o g o n a ll a y o u t ．M e d i aa n dc u l t u r a lc o n d i t i o n si n c l u d i n gM a l t o s e 1 ％( w ／V ) ，P e p t o n e 0 ．5

11、 ％，M a g n e s i u m 4 x 10 4 m o l ／L ，V B 60 ．0 2 ％，p H6 ．0 ，i n o c u l u mv o l u m e5m L ，m e d i u m c a p a c i t y 10 0 m L ／2 5 0m Lf l a s k ，m y c e l i a l a g e7 d a y s ，c u l t u r et i m e 5 d a y s w e r

12、 ee m p l o y e d ，r e s p e c t i v e l y ．U n d e ro p t i m a lc u l t u r ec o n d i t i o n s ，m a x i m u mp r o t e a s ea c t i v i t yr e a c h e d8 5 ．4 6 U m L - l a f t e r 5 d o f f e r m e n t a t i o n ．T

13、h e e n z y m e w a s p u r i f i e d t o e l e c t r o p h o r e t i ch o m o g e n e i t y u s i n g t h e c o m b i n a t i o n o fv a r i o u s c h r o m a t o g r a p h i c s t e p s ：D E A E - c e l l u l o s e ，S

14、e p h a d e xG - 1 0 0 ．T h e p u r i f i e de n z y m e w a s a m o n o m e r w i t h a na p p a r e n t m o l e c u l a rw e i g h to f4 5k D a m e a s u r e db yS D S ·P A G E ．T h eo p t i m a lr e a c t i o nt