肉雞感染FAdV-4后肝臟組織損傷及炎癥相關(guān)基因表達(dá)研究.pdf

1、禽腺病毒Ⅰ群血清4型(Fowl adenovirus serotype4，F(xiàn)AdV-4)病毒感染可引起家禽心包積液綜合征(Hydropericardium syndrome，HPS)。肉雞感染FAdV-4后剖檢病變主要表現(xiàn)為心包腔內(nèi)充盈大量黃色液體、肝臟腫大和壞死。肝臟最典型的病理組織學(xué)變化是肝細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)嗜堿性包涵體。肝臟是FAdV-4主要的靶器官，然而目前關(guān)于FAdV-4對肉雞肝臟炎癥損傷機(jī)理的研究鮮有報道。本研究用FAdV-4人工

2、感染3周齡白羽艾維茵肉雞，HE染色觀察病毒感染后肝臟的組織病變;采用real-time PCR檢測不同感染時間點(diǎn)的肝臟病毒載量;應(yīng)用real-time RT-PCR檢測肝臟炎癥相關(guān)基因在不同感染時間的表達(dá)變化。目的是揭示肉雞感染FAdV-4致使肝臟炎癥損傷的機(jī)理。試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.FAdV-4分離株人工感染能引起非免健康白羽艾維茵肉雞發(fā)生心包積液綜合征。用FAdV-4人工感染非免健康肉雞，分別于1dpi、3dpi、4dpi、

3、5dpi、7dpi、9dpi、11dpi、15dpi頸部放血處死8只感染肉雞，按無菌操作采取肝臟。FAdV-4感染肉雞在4dpi天出現(xiàn)死亡，5dpi病雞出現(xiàn)精神萎靡、食欲減退等。剖檢病雞可見心包腔內(nèi)充滿大量黃色液體和肝壞死。病雞的肝臟HE染色可見大量炎性細(xì)胞浸潤，肝細(xì)胞變性、壞死，肝細(xì)胞核內(nèi)嗜堿性包涵體。
　　2.建立了檢測FAdV-4Hexon基因real-time PCR的方法。參照GenBank中FAdV-4保守序列Hexo

4、n設(shè)計(jì)引物，建立了檢測FAdV-4Hexon基因的real-time PCR的方法。并從感染FAdV-4不同時間點(diǎn)肉雞肝臟中均檢測出該病毒，病毒載量在4dpi達(dá)到峰值。
　　3.采用real-time RT-PCR檢測了FAdV-4感染后不同時間點(diǎn)肉雞肝臟中主要炎癥相關(guān)基因mRNA表達(dá)變化。IL-2基因在肝臟中極顯著上調(diào)(P＜0.001)，IL-6/IFN-β基因上調(diào);IFN-α基因在感染初期下調(diào)，在5dpi顯著上調(diào)(P＜0.01

5、);CXCLi1、CXCLi2和CCR5基因都表現(xiàn)上調(diào)，其中CXCLi2基因上調(diào)倍數(shù)最高(P＜0.001)。IL-4和IL-10基因均呈上調(diào)趨勢，其中IL-4基因在第3dpi，IL-10基因在4dpi極顯著上調(diào)(P＜0.001);TGF-β1和TGF-β2基因在1dpi下調(diào)(P＜0.01)，隨后上調(diào)，其中TGF-β2基因在4dpi顯著上調(diào)(P＜0.001)。
　　綜上所述，F(xiàn)AdV-4感染白羽艾維茵肉雞后能造成肝臟嚴(yán)重病理損傷，引