大鼠脊髓損傷后組織基因表達(dá)譜動(dòng)態(tài)變化的研究.pdf

1、該研究分為以下幾個(gè)部分:一、表達(dá)譜基因芯片的制備:經(jīng)過(guò)cDNA文庫(kù)中克隆挑取、PCR擴(kuò)增制備探針,然后將探針點(diǎn)樣于硅化玻片上,再經(jīng)過(guò)點(diǎn)樣后水合、紫外交聯(lián)等步驟,制成表達(dá)譜基因芯片.二、動(dòng)物實(shí)驗(yàn):封閉群健康成年SD大鼠27只,隨機(jī)分為:無(wú)損傷組及損傷后2、48h,每組3只(實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次).依Nystrom法后路壓迫脊髓(35.0g×10min),建立脊髓損傷模型,無(wú)損傷組僅行脊髓暴露而不致傷脊髓.三、依不同的實(shí)驗(yàn)分組,腹腔麻醉、無(wú)菌操作下

2、取出傷段或相應(yīng)部位脊髓組織,經(jīng)過(guò)RNA提取、熒光標(biāo)記制備探針、芯片雜交和洗片、芯片掃描及計(jì)算機(jī)軟件分析等過(guò)程,測(cè)定脊髓損傷后不同時(shí)期組織基因表達(dá)譜.結(jié)果:與正常組比較,在脊髓損傷后2h,共有45條基因的表達(dá)發(fā)生了明顯變化,其中表達(dá)升高的有22條,表達(dá)下降的有23條;而在損傷后48h,共發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)基因185個(gè),其中表達(dá)升高的有35條,下降的有150條,發(fā)生差異表達(dá)的基因主要編碼細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)、蛋白翻譯合成、能量代謝相關(guān)蛋白等方面.結(jié)論: