肝臟中限制炎癥損傷的保護(hù)機(jī)制研究.pdf

1、肝細(xì)胞凋亡和壞死是肝臟損傷的關(guān)鍵性病理特征。大規(guī)模的肝細(xì)胞凋亡和壞死可導(dǎo)致急性肝功能衰竭(ALF)。ALF是一種嚴(yán)重危及生命的臨床綜合征，病情危重，預(yù)后惡劣，死亡率高達(dá)70％-80%。目前尚無針對ALF的特效療法，因此，對于ALF的發(fā)生機(jī)制和治療策略的研究具有重大的醫(yī)學(xué)意義和臨床運用價值。
　　 在肝細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄抑制劑D-(+)-半乳糖胺(D-galactosamine)存在的情況下，脂多糖(LPS)可以通過誘導(dǎo)腫瘤壞死因子α

2、(TNFα)引起肝細(xì)胞的凋亡和壞死，進(jìn)而誘發(fā)ALF。LPS或TNFα單獨作用時則不能誘導(dǎo)ALF的發(fā)生。我們猜測D-galactosamine是通過抑制某些必需的肝保護(hù)因子的產(chǎn)生，使得肝細(xì)胞對LPS或TNFα的細(xì)胞毒性效應(yīng)敏感。為此，我們運用全基因表達(dá)譜芯片和RNA-Seq數(shù)字基因表達(dá)譜芯片技術(shù)，高通量的篩查相關(guān)的肝保護(hù)因子，在體外和體內(nèi)詳細(xì)的研究它們的功能和作用機(jī)制，并探討其以AAV8(Adeno-associatedvirus8)為載

3、體對ALF進(jìn)行基因治療的可行性。
　　 通過基因芯片結(jié)果我們挑選了10個候選基因進(jìn)行了相關(guān)的研究，分別為Ifit1、Ifit2、Ifgbp1、Tifa、Errfi1、Rnd1、Rsad2、Birc2、Birc3和A20，其中A20為陽性對照。通過Lentivirus病毒載體，我們構(gòu)建了這10個候選基因的穩(wěn)定過表達(dá)細(xì)胞系，并對其進(jìn)行了WST-1細(xì)胞毒性檢測和細(xì)胞生存分析，結(jié)果表明Rsad2、Errfi1和Birc3基因的過表達(dá)可以