黃芪多糖對(duì)腦死亡狀態(tài)下肝臟損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察腦死亡狀態(tài)下及腦死亡至心臟死亡過(guò)程中的生命體征變化。探討肝臟在腦死亡狀態(tài)下的損傷情況及其發(fā)生機(jī)制。探討黃芪多糖(APS)在家兔腦死亡至心臟死亡過(guò)程中對(duì)肝臟的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)分為兩大部分
　　 第一部分：復(fù)制漸進(jìn)性顱內(nèi)加壓腦死亡模型，觀察誘導(dǎo)腦死亡及腦死亡至心臟死亡過(guò)程中的生命體征變化。
　　 方法：采用健康成年新西蘭兔12只，雌雄不拘，體重(2.8±0.3)Kg，隨機(jī)分為假手術(shù)組(C組)、腦死亡4h

2、組(B1組)及腦死亡8h組(B2組)，每組4只。C組氣管插管，股動(dòng)靜脈穿刺置管；鉆孔顱內(nèi)置Foley球囊導(dǎo)管，但不加壓，麻醉8h。B1、B2組加壓復(fù)制腦死亡模型后分別維持4h、8h，監(jiān)測(cè)腦死亡建立過(guò)程中MAP、HR、RR變化及停止搶救后向心臟死亡過(guò)程中MAP、HR值變化，記錄撤除搶救措施至心臟死亡時(shí)間。
　　 第二部分：腦死亡狀態(tài)對(duì)肝臟功能與形態(tài)的影響及其機(jī)制，黃芪多糖對(duì)腦死亡家兔肝臟的保護(hù)作用。
　　 方法：健康成年新

3、西蘭兔24只，雌雄不拘，體重(2.8±0.3)Kg，隨機(jī)分為假手術(shù)組(C組)、腦死亡組(B組)、黃芪多糖(APS)保護(hù)組(S組)，每組8只。B、S組運(yùn)用漸進(jìn)性顱內(nèi)加壓腦死亡模型，誘導(dǎo)腦死亡；C組，鉆孔顱內(nèi)置Foley球囊導(dǎo)管，但不加壓，其他同B、S組。S組為黃芪多糖干預(yù)的腦死亡組，于麻醉后即刻經(jīng)股靜脈推注注射用黃芪多糖(APS)12mg/kg。C組假手術(shù)后4h(T1)，B組與S組誘導(dǎo)腦死亡后4h(T1)隨機(jī)抽4只新西蘭兔取標(biāo)本，另4只新

4、西蘭兔于假手術(shù)后8h(T2)及誘導(dǎo)腦死亡后8h(T2)取標(biāo)本。股動(dòng)脈抽取血液標(biāo)本5mL并切取肝臟組織凍存?zhèn)錂z。檢測(cè)血清急性肝損指標(biāo)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)測(cè)定血清TNF-α。HE染色觀察肝組織病理學(xué)改變，免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)肝組織NF-κB p65蛋白的表達(dá)情況。運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)法檢測(cè)肝組織ICAM-1 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。測(cè)定T1肝組織中總超氧化物歧化酶

5、(T-SOD)的活性。
　　 結(jié)果：第一部分：腦死亡組顱內(nèi)加壓后，平均動(dòng)脈壓明顯上升(p<0.05)；腦死亡組BD2h后HR較加壓前明顯下降(p<0.05)；腦死亡組加壓后RR較加壓前上升(p<0.05)；腦死亡組在停止搶救后0.5min、3min、6min時(shí)MAP、HR均低于對(duì)照組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；停止搶救后，B1組與B2組心臟存活時(shí)間，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 第二部分：1、血清ALT、AST、TNF-α水平：C組

6、T1、T2三指標(biāo)無(wú)顯著性差異(P>0.05)。B組、S組相同時(shí)間點(diǎn)均顯著高于C組(P<0.05)。B組T2各指標(biāo)顯著高于T1(P<0.05)。S組T2 ALT、TNF-α水平顯著高于T1(P<0.05)，AST兩時(shí)間點(diǎn)差異不顯著(P>0.05)。S組各時(shí)間點(diǎn)三指標(biāo)均顯著低于B組(P<0.05)。
　　 2、免疫組化檢測(cè)肝組織NF-κB p65蛋白表達(dá)：采用圖像定量分析軟件測(cè)量平均光密度值(OD)對(duì)免疫組化結(jié)果進(jìn)行定量分析。3組N

7、F-κB p65蛋白T1表達(dá)水平相似，相對(duì)較弱，OD值無(wú)顯著性差異(P>0.05)。B組、S組T2表達(dá)較T1明顯增強(qiáng)(P<0.05)。C、S組各組內(nèi)OD值T1、T2無(wú)顯著差異(P>0.05)。B組表達(dá)T2較T1顯著性增強(qiáng)(P<0.05)。S組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)蛋白表達(dá)量均低于B組(P<0.05)。
　　 3、RT-PCR：ICAM-1 mRNA轉(zhuǎn)錄水平，C組各時(shí)間點(diǎn)無(wú)顯著性差異(P>0.05)；B、S組T2表達(dá)均強(qiáng)于T1(P<0.05)

8、。3組對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)轉(zhuǎn)錄水平亦有顯著性差異(P<0.05)。
　　 4、T1時(shí)S組肝組織中總超氧化物歧化酶(T-SOD)的活性較C、B組明顯升高(P<0.05)。
　　 5、HE染色光鏡下：C組肝臟組織結(jié)構(gòu)正常。B組T2點(diǎn)肝細(xì)胞明顯腫脹，排列紊亂擁擠，肝竇受壓變窄，胞質(zhì)疏松淡染呈網(wǎng)狀，氣球樣改變，匯管區(qū)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。S組T2點(diǎn)肝細(xì)胞增大水腫，胞質(zhì)疏松，少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　 結(jié)論：1、漸進(jìn)式顱內(nèi)加壓誘導(dǎo)腦死亡后，通

9、過(guò)呼吸機(jī)輔助呼吸及應(yīng)用血管活性藥物等措施，能較長(zhǎng)時(shí)間維持腦死亡機(jī)體血流動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定。腦死亡后，搶救措施得當(dāng)可以使心臟功能長(zhǎng)時(shí)間的不衰。停止搶救后，MAP、HR呈漸進(jìn)性下降，短時(shí)間內(nèi)即全部進(jìn)入無(wú)心跳死亡(Non heart beating death，NHBD)。
　　 2、腦死亡狀態(tài)下兔血清ALT、AST、TNF-α水平升高。肝臟組織粘附分子ICAM-1 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)升高。肝組織中NF-κB p65蛋白的翻譯水平增加。升