苦參堿微乳透皮給藥系統(tǒng)的制備及體內(nèi)外評價.pdf

1、苦參堿(Matrine,Mat)是苦參中起治療作用的有效成分?，F(xiàn)代研究證明其有激素樣作用而無激素副作用,是治療皮膚過敏性疾病的有效藥物。目前,Mat的透皮給藥制劑如水溶液、軟膏、水凝膠等均存在藥物有效劑量維持時間短、給藥次數(shù)頻繁、透皮效果不佳等缺點,故嘗試將其制備為新型透皮給藥系統(tǒng),以獲得穩(wěn)定持久的有效藥物濃度,提高其透皮效率和治療效果。 微乳(Microemulsion,ME)是一種新型的透皮給藥載體,能有效增溶藥物,形成較高

2、的濃度梯度。疏水部分與角質(zhì)層相互作用,干擾脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)；親水部分可水化角質(zhì)層,其共同作用可增強(qiáng)角質(zhì)層的透過性,促進(jìn)藥物的透皮吸收。因此,微乳透皮制劑引起了透皮給藥載體領(lǐng)域的廣泛關(guān)注和研究。 本課題制備Mat微乳透皮給藥系統(tǒng),以獲得更加持久穩(wěn)定的血藥濃度,更高的生物利用度,增加患者的用藥順應(yīng)性,提高其臨床治療效果。本研究以體外透皮實驗中的藥物單位面積累積透皮量Q為考察指標(biāo),對Mat微乳透皮給藥系統(tǒng)進(jìn)行處方優(yōu)化和制備工藝篩選；進(jìn)

3、行體外制劑學(xué)評價；采用SD大鼠卵蛋白被動皮膚致敏模型進(jìn)行藥效學(xué)研究;采用昆明種小鼠,對Mat微乳組、Mat水溶液組與Mat靜脈注射組進(jìn)行藥動學(xué)考察,對其藥動學(xué)參數(shù)進(jìn)行對比研究。 一、苦參堿體外透皮實驗方法的建立 本研究建立了小鼠離體皮膚體外透皮實驗方法。采用Valia-Chien擴(kuò)散池,供給液和接收液置于離體皮膚兩邊,32±1℃恒溫恒速持續(xù)攪拌,定時取樣并補(bǔ)加等量空白接收液,樣品適當(dāng)處理,HPLC檢測。 本研究建立了

4、Mat樣品的高效液相色譜定量分析法。色譜柱:Kromosil ODS C18柱(4.6mm×150mm,5μm);紫外檢測波長：215nm;流速：1.0mL·min-1;流動相：乙睛-0.2mol·L-1磷酸二氫鉀水溶液(0.1％三乙胺)(15:85),藥物濃度與峰面積之間具有良好線性關(guān)系,精密度、準(zhǔn)確度良好,符合分析要求。 二、苦參堿微乳的處方優(yōu)化和制備工藝篩選 本研究對Mat微乳進(jìn)行了處方優(yōu)化。首先,以無毒無刺激性的

5、制劑輔料作為備選組分,以輔料對Mat的促透作用為評價指標(biāo),并考察輔料對Mat的溶解能力,確定體系的組成成分。 考察結(jié)果,卵磷脂(Lecithin E200)為乳化劑、聚氧乙烯辛基苯基醚(OP)為助乳化劑、肉豆蔻酸異丙酯(IPM)為油相、去離子水為水相。繪制偽三元相圖,Lecithin E200與OP的重量比值為5:5、4:6、3:7時可成乳,3:7時有最大成乳面積,故確定處方中Lecithin E200與OP的重量比值為3:7。

6、于相圖上下左右中各取1個處方,進(jìn)行離體皮膚體外透皮實驗,當(dāng)處方組成為1％Mat、25％LecithinE200/OP(3:7)、12％IPM、62％水時,Mat有最大單位面積累積透皮量Q。對不同處方組成的Mat微乳進(jìn)行體外評價,實驗結(jié)果表明,當(dāng)處方中油相含量增加時,Mat微乳系統(tǒng)粒徑變大,zeta電位無顯著變化；所有處方組成的Mat微乳,電導(dǎo)率均大于100μS·cm-1,并且當(dāng)處方中水相含量增加時電導(dǎo)率增加,表明制備得到的Mat微乳為O

7、/W型；透射電鏡圖片顯示,不同處方組成的Mat微乳,粒子外觀形態(tài)變化不大,均呈類橢圓形。本研究考查了Mat微乳的制備工藝,并對不同制備工藝得到的Mat微乳進(jìn)行評價。以Mat體外透皮實驗中的Q為評價指標(biāo),比較了傳統(tǒng)的水分滴加法、加大外力做功的超聲乳勻法和高壓均質(zhì)法三種制備方法,實驗結(jié)果表明,三者中最佳制備工藝為高壓均質(zhì)法,既初乳制備溫度37℃、均質(zhì)壓力一級閥50bar、二級閥500bar、均質(zhì)循環(huán)次數(shù)3次。三種制備工藝得到的微乳外觀無差別

8、,均為淡黃色透明液體；粒徑大小差別顯著,高壓均質(zhì)法制備得到的Mat微乳粒徑最小為30 nm左右,超聲均質(zhì)法制備得到的Mat微乳粒徑偏大為80nm左右,而傳統(tǒng)的手工滴加法制備得到的Mat微乳粒徑為120nm左右；不同制備方法對Mat微乳zeta電位無顯著影響；透射電鏡圖片顯示,制備方法施加的外力做功增大,微乳的粒子形態(tài)更為統(tǒng)一圓整。 本研究對Mat微乳的穩(wěn)定性進(jìn)行了初步考察。高速離心實驗表明,高速離心30min,其外觀未發(fā)生變化,

9、無沉降絮凝等不穩(wěn)定現(xiàn)象。室溫避光條件下放置6個月,Mat微乳外觀不發(fā)生變化,藥物含量不下降,各項理化性質(zhì)參數(shù)不發(fā)生變化,表明制各得到的Mat微乳穩(wěn)定性良好。 三、苦參堿微乳的皮膚刺激性和藥效學(xué)考察 本研究對Mat微乳的皮膚刺激性進(jìn)行了考察,以生理鹽水為對照,新西蘭大白兔為實驗動物。單次給藥后,皮膚無紅斑、水腫等刺激性現(xiàn)象發(fā)生:多次給藥后,皮膚無紅斑,但有水腫出現(xiàn),去除藥物后可恢復(fù),表明Mat微乳符合透皮制劑要求。

10、 本部分以SD大鼠同種被動皮膚過敏為模型,采用卵白蛋白為抗原,白百破疫苗為佐劑,對Mat微乳進(jìn)行藥效學(xué)研究。通過測定反應(yīng)藍(lán)斑的吸光度,來評價Mat微乳的藥效。結(jié)果表明,與Mat水溶液相比,Mat微乳對皮膚過敏有顯著的抑制作用,但單次給藥效果不如陽性對照地塞米松軟膏組。 四、苦參堿微乳的藥動學(xué)研究 本部分采用昆明種雄性小鼠為試驗動物,通過腹部涂抹Mat微乳進(jìn)行體內(nèi)藥動學(xué)研究,在規(guī)定的時間點進(jìn)行眼眶摘除取血,高效液相色譜測定

11、血藥濃度,繪制藥時曲線,求算藥動學(xué)參數(shù)。同時,采用昆明種小鼠靜脈注射Mat生理鹽水溶液作為陽性對照組,計算絕對生物利用度。 Mat靜注后Cmx為378.11ng·mL-1, MRT為2.82h;Mat微乳組的Tmax為8.17h,Cmax為138.94ng·mL-1,MRT為24.60h;Mat水溶液組的Tmax為12.00h.,Cmax為150.04ng·mL-1,MRT為17.38h。微乳組的Cmax明顯降低,說明該微乳制劑

12、具有平穩(wěn)血藥濃度的作用；MRT比靜注組和水溶液組顯著延長,說明該微乳制劑具有緩釋的特點。不扣除微乳和水溶液中的殘留藥量,分別與注射劑組相比,微乳組的絕對生物利用度為55.89％,水溶液組的絕對生物利用度為40.96％,微乳組的絕對生物利用度顯著優(yōu)于水溶液組。本研究為今后Mat微乳透皮給藥系統(tǒng)的研制及中試生產(chǎn)的制備工藝提供了參考依據(jù),該體系具備體外性質(zhì)穩(wěn)定,效果顯著,延緩給藥間隔時間等優(yōu)點。因此Mat微乳制劑具有良好的臨床應(yīng)用和產(chǎn)品開發(fā)前