羥基喜樹堿混合膠束給藥系統(tǒng)的制備及評(píng)價(jià).pdf

1、羥基喜樹堿(hydroxyl camptothecin，HCPT)是從我國特有的珙垌科喬木喜樹種子中分離提取的一種微量生物堿，是目前從喜樹中分離出的單體中抗癌作用最強(qiáng)的化合物之一，具有廣譜抗癌活性，如肺癌，卵巢癌，乳腺癌，胰腺癌等。關(guān)于羥基喜樹堿抗腫瘤作用的機(jī)制，早期研究表明，它在體外是一種強(qiáng)大的核酸合成抑制劑，并不是通過抑制核苷酸合成，亦不是通過影響DNA、RNA聚合酶，它對(duì)RNA的合成抑制是可逆的，對(duì)DNA的合成抑制較持久，對(duì)rRN

2、A生物合成的作用大于其他RNA的作用，對(duì)蛋白質(zhì)的合成影響較小。
　　 羥基喜樹堿類藥物六元α-羥基內(nèi)酯環(huán)的完整性是保證其為拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑的必須結(jié)構(gòu)，然而內(nèi)酯型HCPT為水脂均難溶的藥物，難以制備成可達(dá)到臨床所需載藥量的制劑，并且根據(jù)pH不同，存在兩種結(jié)構(gòu)。在pH低于5時(shí)，以具有活性的內(nèi)酯形式存在；當(dāng)pH近中性時(shí)，以低活性的開環(huán)羧酸鹽形式存在，因此嚴(yán)重影響羥基喜樹堿在臨床上的應(yīng)用，目前臨床上通過堿化開環(huán)的方法將其制成鈉鹽水針或

3、粉針，雖增加了水溶性，但活性只有內(nèi)酯形式的1/10，故療效降低且半衰期短因此，增加內(nèi)酯型羥基喜樹堿在水中的溶解性，對(duì)提高其在臨床應(yīng)用中的療效和降低毒性方面具有重要的意義。
　　 基于上述原因，為提高其水溶性及靶向性，降低毒副作用目前研究較多的有前體藥物、微球、乳劑、膠束、脂質(zhì)體、固體脂質(zhì)納米粒、非離子表面活性劑泡囊、納米粒等形式。本課題的目的是制備一種在體內(nèi)循環(huán)系統(tǒng)中穩(wěn)定的、耐稀釋的膠束給藥系統(tǒng)。本實(shí)驗(yàn)中以磷脂(PC)和D-α-

4、維生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)為材料，難溶性抗癌藥物HCPT為模型藥物，分別采用兩種方法制備羥基喜樹堿混合膠束：第一種首先將羥基喜樹堿制成磷脂復(fù)合物，然后與TPGS混合制備混合膠束；第二種直接制備羥基喜樹堿、PC、TPGS混合膠束。通過考察兩種混合膠束系統(tǒng)的載藥量、包封率等指標(biāo)，對(duì)喜樹堿混合膠束給藥系統(tǒng)進(jìn)行了綜合評(píng)價(jià)；通過研究膠束的體外釋放行為，體外抗腫瘤活性，驗(yàn)證藥物的靶向性及緩釋性；選擇一種較優(yōu)給藥系統(tǒng)，為探索抗腫瘤藥

5、物靶向給藥治療的應(yīng)用提供了理論和試驗(yàn)依據(jù)。本課題的主要研究結(jié)果如下：
　　 1.含量測(cè)定方法的建立。標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立，并且考查方法的精密度和回收率。建立了羥基喜樹堿的紫外含量檢測(cè)方法。
　　 2.考察先制備羥基喜樹堿磷脂復(fù)合物，然后與TPGS混合制備羥基喜樹堿混合膠束的方法。首先制備羥基喜樹堿磷脂復(fù)合物并確定其結(jié)構(gòu)，然后與TPGS混合制備混合膠束。以載藥量和包封率為考察指標(biāo)，采用單因素分析方法考察羥喜樹堿膠束制備的影響因素

6、。在對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析的基礎(chǔ)上，對(duì)處方進(jìn)行優(yōu)化，得到優(yōu)化處方。本實(shí)驗(yàn)采用均勻設(shè)計(jì)法對(duì)膠束的處方進(jìn)行優(yōu)化。選擇對(duì)混合膠束載藥量影響較大的四個(gè)因素作為考察對(duì)象，即TPGS的量、磷脂的量、水化介質(zhì)的PH和水化體積這四個(gè)因素，每個(gè)因素有三個(gè)水平，最后得出：選擇羥基喜樹堿：磷脂=5mM：5mM(質(zhì)量比=9mg：19mg)，TPGS為15mM(質(zhì)量為113.5mg)，水化體積為5ml，水化介質(zhì)的PH為4時(shí)為最優(yōu)處方，選擇最優(yōu)處方測(cè)定的載藥量為2.9

7、2％，包封率為44.3％。然后進(jìn)行穩(wěn)定性考查和體外溶出度測(cè)定評(píng)價(jià)
　　 3.考察直接將HCPT、TPGS和卵磷脂混合制備膠束的方法。首先采用單因素分析方法考察羥基喜樹堿膠束制備的影響因素。在對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析的基礎(chǔ)上，對(duì)處方進(jìn)行優(yōu)化。以載藥量和包封率為考察指標(biāo)，以均勻設(shè)計(jì)法對(duì)膠束的處方進(jìn)行優(yōu)化，選擇TPGS的量、磷脂的量、水化介質(zhì)的pH和給藥量四因素，每個(gè)因素有三個(gè)水平進(jìn)行考查，最后得出選擇羥基喜樹堿11mg，PC11.4mg，