苦參堿注射劑的含量測定及體內(nèi)藥代動力學(xué)一致性評價.pdf

1、目的：苦參堿（matrine, MT）是苦參的主要有效成分，苦參堿注射劑作為中藥注射劑應(yīng)用于肝炎的治療。目前，苦參堿的研究主要集中在抗腫瘤機(jī)制研究、藥代動力學(xué)研究、劑型研究等，其注射劑的一致性研究尚未見報道。因此，本試驗將建立快速、高效、準(zhǔn)確的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）測定苦參堿注射劑體外含量及體內(nèi)血藥濃度，以期評價苦參堿注射劑不同廠家及批次的含量一致性和體內(nèi)藥代動力學(xué)一致性。
　　方法：
　　1、不同廠家及批次

2、苦參堿注射劑的體外含量測定及一致性評價
　　1.1色譜條件
　　色譜柱：kinetex C18（2.1×100 mm,2.6μm）；流動相：0.05％甲酸，10mM醋酸銨水溶液（A）-甲醇（B）；流速：0.3ml·min-1;洗脫條件：20%甲醇等度洗脫;離子源：ESI；離子監(jiān)測方式：MRM；離子極性：正離子；苦參堿離子對：249.2/148.2 m/z，CE：52eV，DP：80 eV；氧化苦參堿離子對：265.2/205

3、.1 m/z，CE：40 eV，DP：100 eV；氧化槐果堿離子對：263.2/245.3 m/z，CE：35 eV，DP：110 eV。
　　1.2含量測定及一致性評價
　　將3個廠家不同批號苦參堿注射劑稀釋至50μg·ml-1，取20μL置980μL水中稀釋，渦旋混勻，再取20μL置980μL水中稀釋，混勻后進(jìn)樣測定。用統(tǒng)計軟件SPSS17.0對苦參堿實測濃度進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用單因素方差分析統(tǒng)計方法對含量進(jìn)行一致性評價

4、。
　　2、LC-MS/MS法測定苦參堿血漿藥物濃度
　　2.1色譜條件
　　色譜柱、流動相、流速同1.1，洗脫條件：梯度洗脫。除無氧化槐果堿離子對條件，其他離子對條件同1.1。
　　2.2樣品預(yù)處理
　　精密取血漿樣品100μL，加內(nèi)標(biāo)氧化苦參堿（1.5μg/ml）20μL，加甲醇500μL，渦旋，離心（15000 g·min-1），精密取上清50μL加入450μL水，渦旋，離心，進(jìn)樣，建立血藥濃度測定方

5、法。
　　3、不同廠家苦參堿注射劑的體內(nèi)一致性評價
　　3.1實驗動物分組及給藥
　　SD大鼠50只，按體重隨機(jī)分5組,（苦參堿注射液腹腔注射組、注射用苦參堿腹腔注射組、苦參堿氯化鈉注射液腹腔注射組、苦參堿注射液尾靜脈注射組、注射用苦參堿尾靜脈注射組），給藥劑量均為15 mg/kg，于給藥前及給藥后不同時間點于眼內(nèi)眥取血。
　　3.2一致性評價
　　用DAS3.0軟件處理血藥濃度，得到不同廠家給藥后大鼠房室

6、及非房室模型的藥代參數(shù)，用SPSS17.0處理藥代參數(shù)，采用單因素方差分析、t檢驗、兩獨立樣本的非參數(shù)檢驗、多獨立樣本的非參數(shù)檢驗的統(tǒng)計學(xué)方法對不同廠家苦參堿注射劑進(jìn)行體內(nèi)藥代動力學(xué)一致性評價。
　　結(jié)果：
　　1、不同廠家及批次苦參堿注射劑的體外含量測定及一致性評價
　　方法學(xué)結(jié)果顯示標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=1.3×104X+801，r=1.0000，最低檢測限：10ng/ml，方法精密度 RSD均﹤2%，苦參堿注射劑2

7、4h內(nèi)樣品穩(wěn)定性RSD均﹤2%，加樣回收率控制在98%-100%之間，樣品含量測定結(jié)果均在97%-100%之間，SPSS13.0統(tǒng)計分析得各含量之間無統(tǒng)計學(xué)差異，苦參堿注射劑不同廠家及批次含量具有一致性。
　　2、LC-MS/MS法測定苦參堿血漿藥物濃度
　　方法學(xué)結(jié)果顯示所選方法專屬性高,血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾測定，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：Y=0.00501X-0.00453，r=0.9983，最低定量限為10ng/ml，最低定量限

8、的RSD%小于20%，質(zhì)控樣品的日內(nèi)和日間RSD均小于15%，質(zhì)控樣品和定量下限的準(zhǔn)確度均在85-115%范圍內(nèi)，室溫、4℃、自動進(jìn)樣器、凍融、低溫長期放置、稀釋穩(wěn)定性的準(zhǔn)確度均在85-115%范圍內(nèi)，基質(zhì)效應(yīng)、殘留效應(yīng)均符合質(zhì)量規(guī)范要求。
　　3、不同廠家苦參堿注射劑的體內(nèi)一致性評價
　　腹腔注射給藥的 A、B、C三個廠家的非房室模型參數(shù) AUC（0-t）、AUC（0-∞）、C max、t max、t1/2、Vd、CL，一

9、室模型主要藥代參數(shù)AUC（0-t）、AUC（0-∞）、t1/2、Vd、CL、ke、ka、Cmax均無統(tǒng)計學(xué)差異（P﹥0.05）。
　　尾靜脈注射的A、B兩個廠家的非房室模型參數(shù)AUC（0-t）、AUC（0-∞）、C max、C0、t1/2、Vd、CL，及二室模型藥代參數(shù)AUC（0-t）、AUC（0-∞）、t1/2α、t1/2β、Vd、CL、C max均無統(tǒng)計學(xué)差異（P﹥0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、本實驗建立的 L

10、C-MS/MS法測定苦參堿注射劑中苦參堿含量法高效、準(zhǔn)確、簡便，結(jié)果顯示，苦參堿注射劑不同廠家及批次含量無統(tǒng)計學(xué)差異，苦參堿注射劑具有體外含量一致性。
　　2、本實驗建立的 LC-MS/MS法測定苦參堿血藥濃度法高效、準(zhǔn)確、簡便，方法學(xué)考察結(jié)果符合生物制品質(zhì)量控制要求。
　　3、本實驗通過測定血藥濃度，計算藥代參數(shù)，對房室和非房室模型的藥代參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，結(jié)果顯示無統(tǒng)計學(xué)差異，表明苦參堿注射劑在大鼠體內(nèi)具有體內(nèi)藥代動力學(xué)一