云南蘭坪地區(qū)帶絳蟲種類鑒定.pdf

1、目的：對云南蘭坪地區(qū)帶絳蟲（LP株）進(jìn)行種類鑒定；尋找操作簡便、經(jīng)濟(jì)和準(zhǔn)確的帶絳蟲種類鑒定方法。 方法：（1）形態(tài)學(xué)鑒定：采用鹽酸卡紅和孔雀綠染色，選擇7株LP株帶絳蟲成蟲的頭節(jié)、成節(jié)和妊娠節(jié)片，并選取傳統(tǒng)的豬帶絳蟲和牛帶絳蟲為對照，對LP株的種類進(jìn)行初步的形態(tài)學(xué)鑒定；（2）rDNA—ITS限制性酶切片段長度多態(tài)性分析方法：選取妊娠節(jié)片，抽提基因組DNA，PCR擴(kuò)增rDNA—ITS片段，用限制性內(nèi)切酶DdeⅠ對擴(kuò)增片段進(jìn)行酶切分

2、析，并與貴州都勻株（DY株）、牛帶絳蟲從江株（CJ株）及豬帶絳蟲大理株（DLZD株）對照；（3）rDNA—ITS1序列克隆測序方法：隨機(jī)選取一LP株的基因組DNA，進(jìn)行rDNA—ITS1 PCR擴(kuò)增、克隆和測序，并與Genbank中已知DY株、CJ株和ZD株以及云南大理株（DL株）的rDNA—ITS1序列進(jìn)行同源性比較，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹狀圖。 結(jié)果：（1）由形態(tài)學(xué)析可知，7株LP株頭節(jié)近方形，有4個(gè)吸盤，無頂突和小鉤，成節(jié)卵巢分兩

3、葉，孕節(jié)子宮分支排列大致對稱整齊，每側(cè)分支數(shù)約15～30支，根部具有分支，支端有分叉，形態(tài)介于傳統(tǒng)牛帶絳蟲和豬帶絳蟲間，與報(bào)道的亞洲帶絳蟲相似；（2）不同來源帶絳蟲株rDNA—ITS片段的PCR產(chǎn)物經(jīng)限制性內(nèi)切酶DdeⅠ酶切后，顯示LP株與DY株的RFLP圖譜一致，與DLZD株和CJ株均顯著不同；（3）不同來源帶絳蟲株rDNA—ITS1片段測序結(jié)果經(jīng)同源性分析表明，LP株、DY株、DL株、TW株與CJ株同源性為98%，五株帶絳蟲與ZD株