云南省香格里拉地區(qū)帶絳蟲的分類研究.pdf

1、目的：運用形態(tài)學及分子生物學方法，鑒定云南省香格里拉地區(qū)帶絳蟲的種類，進一步明確該地區(qū)是否存在亞洲帶絳蟲，并為云南省帶絳蟲的分類研究和帶絳蟲病的防治提供科學的參考依據(jù)。 方法：（1）形態(tài)學鑒定：選取云南省香格里拉地區(qū)帶絳蟲成蟲的頭節(jié)、成節(jié)和孕節(jié)節(jié)片，采用鹽酸卡紅和孔雀綠溶液進行染色，并與標準株豬帶絳蟲、傳統(tǒng)牛帶絳蟲進行對照，對香格里拉地區(qū)帶絳蟲的種類進行初步的形態(tài)學鑒定。（2）分子生物學鑒定：從云南省香格里拉地區(qū)采集的帶絳蟲成蟲

2、標本，剪取孕節(jié)節(jié)片，采用酚—氯仿法抽提DNA，PCR擴增rDNA—ITS1區(qū)段，克隆此片段后做序列測定及分析；結(jié)合GenBank中已知的臺灣、貴州省都勻亞洲帶絳蟲，貴州省從江傳統(tǒng)牛帶絳蟲、豬帶絳蟲rDNA—ITS1序列，應(yīng)用CLUSTALX（1.83）和DNAMAN（Version5.2.2）軟件對各標本測序結(jié)果進行同源性分析，計算遺傳距離并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹狀圖。 結(jié)果：（1）形態(tài)學分析結(jié)果提示，云南省香格里拉地區(qū)帶絳蟲標本的頭節(jié)

3、均略呈方形，具有四個吸盤，無頂突和小鉤；成節(jié)卵巢分兩葉，即左右兩葉；孕節(jié)的子宮分支大致對稱，每側(cè)約15～25支。（2）根據(jù)PCR擴增后ITS1測序結(jié)果，香格里拉地區(qū)的帶絳蟲標本與GenBank中的亞洲帶絳蟲序列基本一致，同源性分別為99%和100%；與傳統(tǒng)牛帶絳蟲同源性98%；與豬帶絳蟲同源性92%。構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹顯示：香格里拉地區(qū)的帶絳蟲標本先和臺灣、都勻亞洲帶絳蟲聚類，再和從江傳統(tǒng)牛帶絳蟲相聚，最后和豬帶絳蟲形成姊妹群關(guān)系。