血管內皮抑素與順鉑對Calu-6細胞聯(lián)合作用的觀察.pdf

1、目的：近年來，肺癌的發(fā)病率和死亡率持續(xù)上升，已居各種惡性腫瘤的首位；其中非小細胞肺癌(NSCLC)占80％左右，而確診時約50％的患者為不可手術的晚期患者?；熢贜SCLC的綜合治療中占有重要地位，但化療效果差，容易發(fā)生耐藥。1971年Folkman教授首次提出腫瘤血管生成依賴學說，提出血管生成不僅在腫瘤的生長過程中必需，而且在腫瘤的侵襲和轉移階段也發(fā)揮作用，抗血管生成療法成為腫瘤治療領域的一線曙光。血管內皮抑素(Endostatin)

2、為內源性血管生成抑制劑，能特異性地作用于血管內皮細胞，抑制其生長和遷移、誘導其凋亡，從而抑制血管形成和腫瘤生長。近年來也有研究表明，它還可直接抑制腫瘤細胞生長、誘導腫瘤細胞凋亡，但關于其具體作用機制及信號傳導通路尚不十分清楚。恩度TM(Endostar)是由我國自主研發(fā)的新型重組人血管內皮抑素，臨床試驗結果顯示其具有良好的臨床應用前景，且與化療有增效作用，然對其增效機制、作用特點及最佳用法方面的研究尚不十分清楚。我們選用Calu-6人肺

3、腺癌細胞系，觀察：1、血管內皮抑素(下簡稱內皮抑素)對肺癌細胞Calu-6是否具有生長抑制作用、內皮抑素是否能夠誘導肺癌細胞凋亡及其相關機制。2、內皮抑素與順鉑(DDP)的聯(lián)合是否具有協(xié)同作用，如果有，則進一步探討最佳聯(lián)合用藥的時間、劑量關系及可能的相關機制，以期指導臨床聯(lián)合用藥。3、兩種內皮抑素的作用效果有無差異，以期了解各種血管內皮抑素對腫瘤細胞的作用是否具相同機制、指導制定各血管內皮抑素的共同用藥原則。 方法：1、MTT法

4、測定各藥物對肺癌細胞Calu-6的生長抑制率。2、流式細胞術檢測細胞凋亡及壞死率。3、ELISA檢測細胞凋亡相關蛋白(Bcl-2/Bax、sFas/sFasL)的表達。 結果：內皮抑素具有抑制Calu-6細胞增殖的作用(P<0.05)并呈現(xiàn)時間依賴性、與劑量無明顯依賴、但存在最佳作用濃度；其還可誘導Calu-6細胞凋亡、下調Bcl-2表達、但對Bax的表達無明顯影響、也未檢測到sFas/sFasL的表達。在內皮抑素與DDP聯(lián)合用

5、藥方案中，同時給藥較單藥DDP誘導凋亡及下調Bcl-2表達明顯，序貫給藥與單藥DDP間無明顯差異。恩度、內皮抑素的作用效果差異無統(tǒng)計學意義。 結論：1、恩度、內皮抑素與DDP對Calu-6細胞均具有生長抑制作用，DDP呈現(xiàn)明顯的時間和劑量依賴性，恩度和內皮抑素在一定范圍內具有明顯時間依賴性、而劑量依賴關系不明顯。但恩度與內皮抑素存在一最佳作用濃度，未達到或超過該最佳作用濃度時的抗腫瘤作用可能均不能得到最大發(fā)揮。2、恩度、內皮抑素

6、與DDP均能誘導Calu-6細胞凋亡、下調Bcl-2的表達，對Bax的表達無明顯影響。恩度與內皮抑素的單獨作用效果弱于DDP單藥；各聯(lián)合給藥方案中，序貫給藥較DDP單藥作用無明顯差異，以同時給藥誘導凋亡及下調Bcl-2的表達最明顯。實驗各組均未檢測到對Fas/FasL的表達，關于其是否通過Fas/FasL途徑誘導凋亡尚不能明確，有待進一步的深入研究。3、恩度與內皮抑素在抑制Calu-6細胞生長、誘導其凋亡、下調Bcl-2的表達等方面作用