游離SiO2粉塵體外誘轉(zhuǎn)肺成纖維細胞抑制劑篩選.pdf

1、矽肺是機體吸入大量含有游離SiO2粉塵引起的肺部疾病。大多數(shù)矽肺的發(fā)生是一個慢性過程,主要伴隨著大量的矽性蛋白沉積。其病理特征為肺泡腔內(nèi)有大量的蛋白分泌物,隨后可伴有纖維組織彌漫增生,形成小纖維灶乃至矽結(jié)節(jié)。成纖維細胞在其中起到重要作用。游離SiO2粉塵能夠激活肺成纖維細胞,成纖維細胞激活后表達a-平滑肌肌動蛋白(a-SMA)轉(zhuǎn)化為肌成纖維細胞,能夠大量分泌細胞外基質(zhì),尤其是膠原纖維,是肺部蛋白沉積的主要因素。
　　 因此,抑制

2、肺成纖維細胞的激活,抑制其蛋白的分泌,尤其是膠原蛋白的分泌是抑制矽肺發(fā)生發(fā)展的重要環(huán)節(jié)。通過體外分離培養(yǎng)SD大鼠肺巨噬細胞、肺成纖維細胞。應用游離SiO2粉塵刺激巨噬細胞后取培養(yǎng)上清誘轉(zhuǎn)肺成纖維細胞,研究RGD短肽、秋水仙堿、干擾素a-1b和甲磺酸伊馬替尼對誘轉(zhuǎn)后肌成纖維細胞的抑制作用,為進一步對肺纖維化的治療研究提供參考依據(jù)和基礎(chǔ)資料。
　　 目的:觀察RGD短肽、秋水仙堿、干擾素-a1b和甲磺酸伊馬替尼對游離SiO2刺激引起

3、的肺成纖維細胞激活效應的體外抑制作用。尋求合適的肺肌成纖維細胞的抑制劑。
　　 方法：1用無血清的游離SiO2粉塵培養(yǎng)基刺激巨噬細胞(AM)24 h,收集培養(yǎng)液上清并離心去除SiO2,SiO2組用收集所得的上清培養(yǎng)肺成纖維細胞(LF)；正常組用無游離SiO2粉塵刺激的AM上清培養(yǎng)LF。受游離SiO2粉塵刺激的AM上清培養(yǎng)基中加入RGD短肽、或秋水仙堿、或IFN-a1b、或IM,培養(yǎng)LF24h。
　　 2應用MTT實驗測定

4、細胞的活性；應用real-time PCR檢測a-SMA、Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原的mRNA水平；應用ELISA法測定COLⅠ和COLⅢ的分泌；BradFord定氮法用來測定培養(yǎng)上清中的總蛋白。
　　 結(jié)果：1 RGD對游離SiO2粉塵誘轉(zhuǎn)LF的活性,各RGD濃度組與SiO2組差異沒有統(tǒng)計學意義。各RGD濃度組的a-SMA、COLⅠ、COLⅢ的mRNA和蛋白分泌水平均低于SiO2組,其中在100μg/ml和150μg/ml濃度組時,差

5、異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 2秋水仙堿對誘轉(zhuǎn)LF的活性,各秋水仙堿濃度組低于SiO2組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),LC25是40μmol/L。各秋水仙堿濃度組的a-SMA、COLⅠ和COLⅢ的mRNA水平低于SiO2組,其中在80μmol/L濃度組時,差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。各秋水仙堿濃度組的COLⅠ和總蛋白的分泌水平低于SiO2組,其中COLⅠ和總蛋白在80μg/ml濃度組時,差異有統(tǒng)計學意義

6、(P＜0.05)。
　　 3 IFN-a1b對誘轉(zhuǎn)LF的活性,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),LC25是100 u/ml。各IFN-a1b濃度組的a-SMA、COLⅠ、COLⅢ的mRNA和蛋白分泌水平均低于SiO2組,其中在1000 u/ml濃度組時,差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 4 IM對誘轉(zhuǎn)LF的活性,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),LC50是5μmol/L。各IM濃度組的a-SMA、COLⅠ和CO

7、LⅢ的mRNA水平低于SiO2組,其中在5μmol/L濃度組時,差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。各IM濃度組的COLⅠ、COLⅢ和總蛋白的分泌水平低于SiO2組,其中COLⅠ和COLⅢ在5μmol/L濃度組時差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：1秋水仙堿、干擾素-a1b和IM抑制了肌成纖維細胞的活化。
　　 2 RGD、秋水仙堿、干擾素-a1b和IM能夠抑制肌成纖維細胞的COLⅠ、COLⅢ等細胞外基質(zhì)的表