游離二氧化硅粉塵對大鼠循環(huán)成纖維細胞作用的體外實驗.pdf

1、關(guān)于成纖維細胞的來源,除傳統(tǒng)的組織來源外,外周血液來源也得到了證實。循環(huán)成纖維細胞(circulating fibrocytes,cFb)可表達造血細胞表面標志并合成多種細胞外基質(zhì)蛋白,以Ⅰ型膠原(Collagen TypeⅠ,Collagen-Ⅰ)、Ⅲ型膠原(Collagen TypeⅢ,Collagen-Ⅲ)、α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscleactin,α-SMA)為主要鑒定標志,它具有合成多種細胞外基質(zhì)蛋白、細胞

2、因子以及遞呈抗原、收縮創(chuàng)面、促進新生血管形成的能力,參與促進損傷愈合及局部組織纖維化的作用。現(xiàn)已證實血液循環(huán)系統(tǒng)存在少量cFb,對于游離SiO2粉塵對循環(huán)成纖維細胞作用的研究尚未見報道。
　　 因此,實驗應用逆轉(zhuǎn)錄PCR法測定Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、α-SMA mRNA表達水平、應用ELISA法測定Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、α-SMA蛋白表達水平,初步探討在體外SiO2粉塵對循環(huán)成纖維細胞的

3、作用。
　　 目的:探討游離SiO2粉塵對循環(huán)成纖維細胞的作用,為進一步探討循環(huán)成纖維細胞在塵肺病中的作用機制提供線索和實驗基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 1.構(gòu)建大鼠外周血cFb、腹腔AM體外原代培養(yǎng)模型,MTT法測細胞生長曲線,用免疫組織化學法鑒定分別受上清液刺激但未經(jīng)SiO2刺激和不受上清液刺激的cFb,用不同濃度游離SiO2粉塵(0、20、40、60、80、100、120μg/ml)刺激巨噬細胞24 h,離心

4、取培養(yǎng)上清液,并用上清液刺激cFb24 h。
　　 2.不同SiO2粉塵濃度刺激不同培養(yǎng)天數(shù)的cFb,采用逆轉(zhuǎn)錄PCR法測定其對Ⅰ型、Ⅲ型膠原、α-SMA mRNA的相對表達水平,免疫組化法和EIASA法測定Ⅰ型、Ⅲ型膠原、α-SMA蛋白的表達水平。
　　 結(jié)果:
　　 1.cFb不受上清液刺激和受上清液刺激(上清液未經(jīng)SiO2刺激)均在培養(yǎng)的第6 d開始表達Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ,在第19

5、d開始表達α-SMA,cFb受上清液刺激(上清液經(jīng)SiO2刺激)在培養(yǎng)的第3 d開始表達Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ,在第13 d開始表達α-SMA。
　　 2.不同濃度SiO2粉塵刺激AM后的上清液刺激cFbCollagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、α-SMA mRNA和蛋白的表達水平:與不加上清液組相比,20、40、60、80μg/ml濃度組差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),從0到80μg/ml濃度組表達逐漸

6、增加。
　　 3.80μg/ml SiO2刺激AM后的上清液刺激不同培養(yǎng)天數(shù)的cFb①Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ mRNA的表達:和第3 d比較,第9、12、15、18 d差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),從第9 d隨培養(yǎng)天數(shù)增加,表達逐漸增加。②α-SMA mRNA的表達平:和第13 d比較,第19、22、25、28 d差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),從第19 d隨培養(yǎng)天數(shù)增加,表達逐漸增加。③Collage

7、n-Ⅰ、Collagen-Ⅲ蛋白的表達:和第3 d比較,第9、12、15、18 d,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),從第9 d隨培養(yǎng)天數(shù)表達增加。④α-SMA蛋白的表達:與第13 d比較,第22、25、28 d差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),從第19 d隨培養(yǎng)天數(shù)表達增加。
　　 結(jié)論:1.經(jīng)游離SiO2粉塵刺激AM的培養(yǎng)上清液可引起血液淋巴細胞向cFb轉(zhuǎn)化的時間提前。
　　 2.經(jīng)游離SiO2粉塵刺激AM的培養(yǎng)上清