hNIS基因組織特異性表達(dá)介導(dǎo)肝癌核素顯像與治療.pdf

1、目的：本研究旨在探索鼠白蛋白基因啟動(dòng)子/增強(qiáng)子(mAlb)調(diào)控下人鈉/碘同向轉(zhuǎn)運(yùn)體(hNIS)基因的組織特異性表達(dá)介導(dǎo)肝癌核素顯像和治療的可行性,為NIS基因作為新型報(bào)告基因和治療基因在基因治療領(lǐng)域的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法： 1、質(zhì)粒構(gòu)建。采用經(jīng)典分子克隆技術(shù)構(gòu)建mAlb調(diào)控下螢蟲素酶表達(dá)載體pmAlb-Luc和mAlb引導(dǎo)下hNIS/潮酶素(hyg)基因共表達(dá)的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pSIRmAlbhNISIVSIREShyg。2、瞬時(shí)轉(zhuǎn)

2、染與熒光檢測(cè)。脂質(zhì)體法將pmAlb-Luc轉(zhuǎn)染鼠肝癌細(xì)胞(MH3924A)、人未分化型甲狀腺癌細(xì)胞(SW1736)、人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)和人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞(LCLC-103H)后24小時(shí)檢測(cè)螢蟲素酶活性以評(píng)價(jià)mAlb的功能和組織特異性。3、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。脂質(zhì)體法將pSIRmAlbhNISIVSIREShyg轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞EcoPake293,獲取重組逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒感染鼠肝癌細(xì)胞(MH3924A),潮霉素篩選3周后建立NIS穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系

3、。4、體外核素?cái)z取和流出實(shí)驗(yàn)。體外培養(yǎng)條件下,評(píng)價(jià)重組肝癌細(xì)胞對(duì)125I或99mTc的攝取和流出情況及各種抑制劑對(duì)攝取和流出過程的影響。5、克隆形成實(shí)驗(yàn)。不同放射性濃度的131I作用下,計(jì)數(shù)克隆形成數(shù)目,評(píng)估131I對(duì)野生型和重組肝癌細(xì)胞的殺傷作用。6、移植瘤模型建立。ACI大鼠側(cè)腹部接種野生型和/或重組肝癌細(xì)胞,待腫瘤長(zhǎng)至直徑0.6-1.0時(shí)用于核素生物分布和治療研究,腫瘤長(zhǎng)至直徑1.0cm時(shí)用于核素顯像研究。7、生物分布。研究不同給