高效液相色譜法檢測孕婦血清中BBP、DBP的含量及其可能的毒理學(xué)意義.pdf

1、鄰苯二甲酸酯類化合物（phthalate esters，PAEs）約有l(wèi)4種，其中鄰苯二甲酸丁芐酯（butyl benzyl phthalate，BBP）、鄰苯二甲酸二正丁酯（di-n-butyl phthalates，DBP）、鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯（Di(2-ethylhexyl)phthalate，DEHP）等在內(nèi)的八種PAEs 已被世界野生動物基金會（WWF）確定為環(huán)境激素類污染物。
　　 PAEs作為增塑劑，主

2、要用于塑料制品的生產(chǎn)加工過程中；此外涉及的PAEs產(chǎn)品還有化妝品、指甲油、洗滌劑、農(nóng)藥、醫(yī)療用品等。在產(chǎn)品的生產(chǎn)過程中，PAEs 并沒有與塑料共價結(jié)合，因此隨著時間的推移，PAEs 會從塑料釋放到環(huán)境中，廣泛存在于水體、土壤、大氣和生物體中，甚至進入食物供應(yīng)鏈，危害人類的健康。
　　 以往有關(guān)PAEs對健康影響的研究大多集中在對生殖發(fā)育方面，主要是動物實驗，而人群資料相對較少，尤其關(guān)于孕婦在PAEs的環(huán)境暴露水平下對其自身以及胎

3、兒的生長發(fā)育方面影響的研究更少。目前人群PAEs的暴露水平對男性生殖健康有很大的影響，但是孕婦在低水平PAEs 暴露時可能會對后代產(chǎn)生神經(jīng)行為方面的不良影響，因此有必要進行進一步研究。
　　 總所周知，在過去幾十年里，男性精子數(shù)量的下降、生育能力下降與越來越多的PAEs污染有關(guān)。此外，1970到1993年流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)美國男性尿道下裂和隱睪的發(fā)病率增加了1倍，睪丸癌和精子質(zhì)量下降等問題也逐年增加。研究還發(fā)現(xiàn)這些異常與PAEs暴

4、露之間存在明顯的相關(guān)性。而PAEs污染對孕婦以及下一代的影響報道不多見。PAEs作為全球性有機污染物，人類已經(jīng)時時刻刻在接觸這樣污染物，而育齡期，尤其是孕產(chǎn)期婦女作為一個特殊人群，應(yīng)該值得特別關(guān)注。
　　 近年來，PAEs的神經(jīng)發(fā)育毒性也逐漸受到關(guān)注。體外實驗發(fā)現(xiàn)PAEs可以透過大鼠卵黃囊直接攻擊胚胎細(xì)胞，卵黃囊生長發(fā)育和血管分化明顯受抑，胚胎生長發(fā)育所需營養(yǎng)物質(zhì)得不到供應(yīng)，造成胚胎缺氧和新陳代謝紊亂，從而抑制胚胎發(fā)育。由于神經(jīng)

5、系統(tǒng)對能量和氧供應(yīng)減少尤其敏感，因此PAEs對神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的潛在毒性的研究不容忽視。動物實驗也表明，DEHP在相對的低劑量時影響小鼠的神經(jīng)行為和大鼠腦芳香化酶的活性。本教研室前期通過體內(nèi)實驗和和體外實驗對PAEs的研究，發(fā)現(xiàn)妊娠期接觸BBP、DBP對大鼠胚胎產(chǎn)生具有一定的胚胎發(fā)育毒性，同時BBP還對F1雄性大鼠的發(fā)育有一定的影響，低劑量組雄性（50mg/kg）仔鼠的平面翻正實驗、空中翻正實驗、開場實驗以及Morris水迷宮實驗結(jié)果與對照

6、組相比，差異均具有顯著性，高劑量組（750mg/kg）雄性仔鼠僅空中翻正實驗、懸崖回避實驗與開場實驗結(jié)果出現(xiàn)陽性變化；而雄性大鼠在相對低水平(25mg/kg)暴露DBP時，雄性大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力明顯降低。
　　 本實驗擬通過建立用高效液相色譜檢測孕婦血清中鄰苯二甲酸酯類的含量的方法，選擇156例孕婦血樣，檢測孕婦血清BBP、DBP的含量，分析其含量與胎兒體重、體長等指標(biāo)的相關(guān)性，以了解在一般環(huán)境條件下，孕婦血清BBP、DBP含量

7、是否會影響胎兒的生長發(fā)育并為制定PAEs 在各種介質(zhì)的安全限值提供依據(jù)。
　　 第一部分、高效液相色譜法檢測孕婦血清鄰苯二甲酸酯類化合物含量方法學(xué)的建立
　　 目的：建立檢測孕婦血清中的2種鄰苯二甲酸酯類化合物的高效液相色譜法。
　　 方法：正己烷提取血清樣品，冷凍離心提取上清液，進行高效液相色譜法測定，并探討最佳實驗條件。
　　 結(jié)果：(1)測定條件：C18 5μm×150mm×4.6mm)色譜柱、乙腈

8、－水作為流動相、流速為1.4ml/min、檢測波長為228nm、柱溫為30℃(2)該方法測得各組分檢出限如下：鄰苯二甲酸丁芐酯為5×10-10g/ml、鄰苯二甲酸二丁酯為2×10-10 g/ml。
　　 (3)該方法測定2種鄰苯二甲酸酯的線性范圍均為1×10-8～1000×10-8g/ml，各組分的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程如下：鄰苯二甲酸丁芐酯為Y=35901x+62940，鄰苯二甲酸二丁酯為Y=26814x+54518；鄰苯二甲酸丁芐酯的

9、工作曲線方程為Y=41873x+37768，鄰苯二甲酸二丁酯的工作曲線方程為Y=39621x+62868。(4)
　　 精密度測定鄰苯二甲酸丁芐酯的精密度相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.44％(n=7)，鄰苯二甲酸二丁酯的精密度相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.5％(n=7)。(5)加標(biāo)回收率測定添加1×10-7g/ml、1×10-6g/ml、5×10-6g/ml的1 ml的標(biāo)準(zhǔn)品混合液，鄰苯二甲酸丁芐酯的回收率分別為99.47%、100.26%、99.66

10、%，相應(yīng)的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為5.47%、0.67%、0.29%；鄰苯二甲酸二丁酯的回收率分別為98.29%、100.66%、99.40%而相應(yīng)的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為3.56%、0.86%、0.60%。
　　 結(jié)論：本法處理簡單、操作準(zhǔn)確、快速，能夠節(jié)省生物樣品,縮短檢測時間,提高檢測效率,適應(yīng)于測定血清中的鄰苯二甲酸酯類化合物。
　　 第二部分、孕婦血清中鄰苯二甲酸酯類化合物（BBP、DBP）的含量及其可能的毒理學(xué)意義

11、r>　　 目的：初步了解孕婦血清鄰苯二甲酸酯類（BBP與DBP）的水平以及初步探討其水平與胎兒生長發(fā)育指標(biāo)之間的相關(guān)性。
　　 方法：采集湖北省三級甲等醫(yī)院156例孕婦基本信息（身高、體重、年齡等）和5ml血樣，運用反相高效液相色譜分析法檢測孕婦血清中鄰苯二甲酸丁芐酯與鄰苯二甲酸二丁酯的含量；新生兒出生后，記錄胎兒的體長、體重，利用多元線性回歸分析孕婦血清PAEs含量與胎兒的體長、體重的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：大多數(shù)孕婦

12、血清均可檢測到鄰苯二甲酸酯類化合物的存在。其中，血清BBP的含量范圍為ND～85.09×10-6g/ml，DBP的含量范圍DN～60.89×10-6g/ml。
　　 血清中BBP的含量的中位數(shù)為6.4×10-7g/ml，DBP的含量的中位數(shù)為3.2×10-7g/ml。
　　 經(jīng)多元線性回歸分析，血清中鄰苯二甲酸酯類的含量與胎兒的生長發(fā)育情況沒有相關(guān)性。
　　 結(jié)論：孕婦血清中鄰苯二甲酸酯類的含量沒有影響胎兒的生長