反相高效液相色譜法檢測嬰幼兒配方乳粉中葉酸的含量

1、營養(yǎng)學(xué)報2009年第31卷第3期289固相萃取反相高效液相色譜法檢測嬰幼兒配方乳粉中葉酸的含量包怡紅，石丹，賈云虹1生慶海12（東北林業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程哈爾濱150040；1河北省乳業(yè)工程技術(shù)研究中心石家莊050071；2東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省乳品工業(yè)技術(shù)開發(fā)中心哈爾濱150086)【摘要摘要】目的目的建立了快速、靈敏的檢測嬰幼兒配方乳粉中葉酸含量的方法。方法方法使用高氯酸在超聲波條件下提取配方乳粉中的葉酸，取一定量的濾液經(jīng)過含有C18

2、填料的固相萃取小柱進(jìn)行除雜，再經(jīng)過高錳酸鉀衍生后利用反相高效液相色譜測定葉酸的含量。流動相選用pH5.0的濃度為0.1molL的磷酸二氫鈉溶液，流動相流速為1.0mlmin，經(jīng)BDSC18色譜柱進(jìn)行分離（柱溫為30℃）。結(jié)果結(jié)果方法在0.005～1.5gml范圍內(nèi)線性良好，方法的平均回收率為91.7%～98.3%，RSD%為2.5%，檢出限為0.005gml，定量限為0.017gml。結(jié)論結(jié)論應(yīng)用本方法檢測嬰幼兒配方乳粉中的葉酸，具有操

3、作簡單、精密度高、準(zhǔn)確度好、容易推廣等優(yōu)點(diǎn)。[營養(yǎng)學(xué)報，2009，31（3）：289－292][營養(yǎng)學(xué)報，2009，31（3）：289－292]關(guān)鍵詞：葉酸；固相萃??；反相高效液相色譜；嬰幼兒配方乳粉中圖分類號：文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：05127955（2009）03028904DETERMINATIONOFFOLICACIDININFANTFMULAMILKPOWDERBYSOLIDPHASEEXTRACTIONREVERSEDPHA

4、SEHIGHPERFMANCELIQUIDCHROMATOGRAPHYBAOYihong，SHIDan，JIAYunhong1，SHENGQinghai12(FoodScienceEngineeringNtheastFestryUniversityHarbin150040；1HebeiDairyEngineeringTechnologyResearchCenterShijiazhuang050071；2HeilongjiangDairy

5、IndustryTechnicalDevelopmentCenterofNtheastAgriculturalUniversityHarbin150086China)【Abstract】ObjectiveAquicksensitivemethodwasdevelopedfdeterminationoffolicacid(FA)ininfantfmulamilkpowder.MethodPerchlicaicdwasaddedintoin

6、fantfmulamilkpowdertoextractFAinultrasonicwavecondition.Aftersolidphaseextraction(SPE)withC18materialasplugreactionwithpotassiumpermanganateFAwasdeterminedbyreversedphasehighperfmanceliquidchromatography(RPHPLC).pH5.00.1

7、molLsodiumdihydrogenphosphatewereusedasmobilephase.theflowratewas1mlmin.BDSC18wasusedasseparatingcolumncolumntemperaturewas30℃.ResultsThelinearrangeofthemethodwas0.005－1.5gml.Theaveragerecoverywas91.7%－98.3%.Therelatives

8、tarddeviation(RSD)was2.5%.Thelimitofdetectionwas0.005gmlthelimitofquantificationwas0.017gml.ConclusionThemethodhasfollowingadvantages:simplepreciseaccurateeasytopractice.[ACTANUTRIMENTASINICA200931(3):289－292]Keywds：foli

9、cacid；solidphaseextraction；RPHPLC；infantfmulamilkpowder葉酸又稱蝶酰谷氨酸（PGA）[1]，是體內(nèi)生化反應(yīng)中一碳單位轉(zhuǎn)移酶系的輔酶起一碳單位傳遞體的作用與許多重要的生化過程密切相關(guān)。90年代初許多國家已開始在日常飲食中有意識地添收稿日期20081208作者簡介包怡紅（1970－），女，副教授，Email：baoyihong@營養(yǎng)學(xué)報2009年第31卷第3期291實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)使用6m

10、l的0.01molL鹽酸溶液除雜時葉酸的回收率最高，當(dāng)繼續(xù)增加鹽酸溶液的用量時葉酸的回收率逐漸降低，這是由于鹽酸溶液將部分葉酸從固相萃取柱中洗脫出來，造成損失。而當(dāng)甲醇使用量達(dá)到5ml之后，葉酸的回收率基本保持不變，這說明5ml的甲醇已經(jīng)基本將全部葉酸洗脫出來，在綜合考慮提高實(shí)驗(yàn)速度和減少實(shí)驗(yàn)試劑用量等因素后，實(shí)驗(yàn)選用5ml的100%甲醇作為洗脫試劑。2.4色譜條件選擇與優(yōu)化2.4.1流動相配比的影響：根據(jù)葉酸的性質(zhì)，實(shí)驗(yàn)主要采用甲醇與

11、磷酸二氫鈉溶液的不同比例混合。實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)流動相中甲醇的比例增加時，葉酸出峰的保留時間有所提前，可以縮短檢出時間，但是葉酸的色譜峰不能有效分開，造成色譜峰的重疊，給數(shù)據(jù)分析帶來影響；當(dāng)流動相中甲醇的比例減少時，葉酸的色譜峰雖然能很好的分開，但是延長了色譜峰的保留時間，降低了檢測速度。經(jīng)過對各種因素的綜合考慮，實(shí)驗(yàn)選用0.1molL磷酸二氫鈉溶液作為流動相。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明葉酸可以在較短的時間內(nèi)很好的分離，且峰形良好，整個分析過程在7m

12、in內(nèi)完成。2.4.2色譜柱溫度的影響：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在20、25、30、35、40℃5種柱溫條件下，隨著色譜柱溫度的升高，柱壓下降，被分析物葉酸的保留時間縮短，但是升高溫度也造成了色譜峰重疊以及峰形的不規(guī)則，給數(shù)據(jù)分析結(jié)果帶來了較大的誤差并且使檢測結(jié)果不夠準(zhǔn)確。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，在30℃的色譜溫度條件下，檢測結(jié)果最好。2.4.3流動相pH值的影響：由于pH值對葉酸的分離度有很大的影響，實(shí)驗(yàn)選用磷酸二氫鈉水溶液作為流動相，用磷酸分別調(diào)0.1m

13、olL磷酸二氫鈉水溶液的pH值為3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0進(jìn)樣，分離結(jié)果表明，流動相pH在3.0～4.0時，pH值越大葉酸的保留時間越往后延，但pH值在4.0以后對葉酸的保留時間沒有影響，但是pH值越大，基線越不平穩(wěn)，雜質(zhì)峰越高，同時低酸度對色譜系統(tǒng)的壽命也有影響。綜合考慮各個因素，實(shí)驗(yàn)選用pH5.0的磷酸二氫鈉水溶液作為流動相。2.4.4流動相流速的影響：在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)流動相流速減少時，色譜峰的分離效果會更好，葉

14、酸的色譜峰可以有效地分開。但是卻延長了葉酸出峰的保留時間，而且葉酸的色譜峰峰寬也會變寬，峰高會降低，這就降低了葉酸檢測的靈敏度，使檢測結(jié)果出現(xiàn)較大誤差。實(shí)驗(yàn)選用1.0mlmin的流速作為流動相的流速。根據(jù)以上確定的實(shí)驗(yàn)參數(shù)進(jìn)行葉酸標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的分析，結(jié)果如圖1，2。Fig.1ThechromatographicpeakofstardsolutionoffolicacidFig.2Thechromatographicpeakofsampl

15、esolutionoffolicacid2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍、檢出限與定量限在上述最佳色譜條件下檢測一系列葉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.01～2.0gml），以各組分的濃度與其峰高進(jìn)行線性回歸，結(jié)果發(fā)現(xiàn)方法在0.005～1.5gml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為y=13.16x1.0495，相關(guān)系數(shù)R2=0.9997。以3倍信噪比（SN）計算，該方法測定葉酸的檢出限為0.005gml；以10倍信噪比（SN）計算，該方法的定量限為0.017g