實驗十二 反相高效液相色譜法測定尼泊金酯

1、儀器分析實驗六反相高效液相色譜內標定量法測定尼泊金酯14實驗六實驗六反相高效液相色譜內標定量法測定尼泊金酯反相高效液相色譜內標定量法測定尼泊金酯預習提示預習提示1.液相色譜儀的基本結構及操作技術2.什么是反相液相色譜，反相高效液相色譜的分離特點是什么。3.相對校正因子的意義及測定方法4.色譜分析內標定量法的原理及操作要點。一、目的要求一、目的要求1.熟悉高效液相色譜儀器基本結構及操作技術；2.掌握HPLC保留值定性方法和內標定量方法。（

2、了解定制報告編輯方法）。二、基本原理二、基本原理1.高效液相色譜是以液體為流動相的色譜。其分離原理是利用不同物質在由固定相和流動相構成的體系中具有不同的分配系數，當兩相作相對運動時，這些物質隨流動相一起運動，并在兩相間進行反復多次的分配，從而使各物質達到分離。正相色譜體系是固定相的極性大于流動相的極性，反之亦然。尼泊金酯（對羥基苯甲酸酯）混合物中含有尼泊金甲、乙、丙、丁酯，均屬于強極性化合物，可用反相HPLC進行分析，選用非極性的C18

3、烷基鍵合固定相，甲醇水溶液作流動相。2.色譜保留值法定性的依據在一定色譜條件下，每一種物質都有一個確定的保留值和它相對應。3.色譜定量依據絕對校正因子不易測定Amii?Afmiii?Amfiii?（相對）校正因子AAmmAmAmfffississiisii????4.對于試樣中某一種或幾種組分定量測定時可用內標定量法。內標法要領：定量試樣m試樣中加入定量內標物ms，LC分析后進行相對定量計算。內標法定量計算公式：)(%mlugAAffV

4、mcisiisisisi???內標物要求：試樣中不存在的純物質；加入量、理化性質、峰位置均與被測組分接近。儀器分析實驗六反相高效液相色譜內標定量法測定尼泊金酯34AAmmfissiwi??3.根據實驗記錄數據計算試樣中尼泊金乙酯的含量（mgL）)(%LmgAAffVmcisiisisisi???4.將所得色譜圖附于“實驗結果處理”后，并對應色譜峰標出相應物質的名稱。七、思考題七、思考題1.液相色譜儀的主要部件有哪些？試畫出HPLC流程方