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文檔簡介
1、目的:觀察尼氟滅酸(niflumic acid, NFA)對大鼠腸系膜微小動脈縫隙連接通訊的影響。
方法:全細(xì)胞膜片鉗觀察1×10-4 mol/L NFA對自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rat, SHR)腸系膜微小動脈平滑肌細(xì)胞縫隙連接通訊的阻斷作用,實驗記錄不同濃度NFA對SHR腸系膜動脈平滑肌細(xì)胞膜電流的影響;運用壓力肌動圖技術(shù)觀察不同濃度NFA對Wistar大鼠和SHR腸系膜微小
2、動脈的直徑變化;Western blot觀察Wistar大鼠和SHR腸系膜動脈一級分支和三級分支Cx43的表達(dá)差異。應(yīng)用血管段孵育通過RT-PCR觀察不同濃度NFA對縫隙連接蛋白中的Cx43 mRNA水平的變化,SHR腸系膜微小動脈平滑肌細(xì)胞原代培養(yǎng)應(yīng)用Western blot觀察不同濃度NFA對平滑肌細(xì)胞Cx43的改變。
結(jié)果:(1)膜片鉗記錄NFA作用于單個平滑肌細(xì)胞達(dá)到最大反應(yīng)的時間為2 min,使用不同濃度的NFA記錄
3、的平滑肌細(xì)胞電流具有濃度依賴性(P<0.01, n=8)。1×10-4 mol/L的NFA作用于一段血管可以顯著降內(nèi)向電流,能夠阻斷縫隙連接通訊,并具有可逆性,細(xì)胞膜電容Cinput的充放電的時間由9.73 ms降低到0.48 ms,具有顯著性的差異(P<0.05, n=6)。
?。?)壓力肌動圖顯示3×10-4 mol/L的NFA可以完全舒張由PE引起的收縮作用,Wistar大鼠的舒張反應(yīng)性高于SHR,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.
4、05, n=6)。
?。?)Western blot結(jié)果顯示SHR和Wistar大鼠,腸系膜血管三級分支Cx43的表達(dá)量均高于一級分支血管;SHR和Wistar大鼠腸系膜同級血管分支比較,SHR Cx43的表達(dá)量高于Wistar大鼠;組間具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=1014.43, P<0.01)。血管段孵育的微小動脈通過RT-PCR顯示:不同濃度的NFA處理的平滑肌細(xì)胞與對照組比較,Cx43 mRNA的表達(dá)均顯著降低且具有濃度依賴性,
5、具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。原代培養(yǎng)的腸系膜微小動脈平滑肌細(xì)胞通過Western blot顯示不同濃度的NFA處理的平滑肌細(xì)胞與對照組比較,Cx43的表達(dá)均顯著降低且具有濃度依賴性,具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=1480.2, P<0.01)。
結(jié)論:高血壓狀態(tài)血管的反應(yīng)性較低這可能與縫隙連接蛋白的高表達(dá)有關(guān),而NFA能夠降低平滑肌細(xì)胞間通訊,舒張腸系膜微小動脈并降低Cx43的表達(dá)。綜上所述,推測尼氟滅酸可以作為以縫隙連接為靶點的潛
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