AngII、胰島素誘導(dǎo)臍靜脈內(nèi)皮細胞環(huán)氧合酶2表達及血脂康干預(yù)影響.pdf

1、研究背景及目的:
　　環(huán)氧合酶(Cyclooxygenase,COX)是花生四烯酸代謝為前列腺素的關(guān)鍵酶;而后者參與了包括炎癥反應(yīng)在內(nèi)的各種生理病理過程。環(huán)氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)作為 COX家族的重要一員,其通常在腫瘤及炎癥反應(yīng)中表達量明顯上升。近年來,關(guān)于COX-2在動脈粥樣硬化(Atherosclerosis, AS)中作用的研究越來越多,發(fā)現(xiàn)COX-2在AS病變的平滑肌細胞、內(nèi)皮細胞及巨噬

2、細胞中均有表達,其表達對血管的保護或損傷作用與COX-2依賴的下游前列腺素酶有關(guān)。我們用血管緊張素II(Angiotensin II,AngII)、胰島素(Insulin,Ins)刺激臍靜脈內(nèi)皮細胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),分別檢測HUVECs的細胞增殖,COX-2 mRNA和蛋白、前列環(huán)素(prostaglandin I2, PGI2)表達量變化以及血脂康干預(yù)的結(jié)果

3、,以探討AngII、Ins促AS作用機制及血脂康抗AS可能的機制。
　　研究方法:
　　將實驗分八組:對照組、血脂康組、Ins組、AngII組、Ins+AngII組、Ins+血脂康組、AngII+血脂康組、Ins+AngII+血脂康組。在體外培養(yǎng)HCVECs,用Ins、AngII及血脂康刺激細胞;其中加入血脂康組,預(yù)先用血脂康孵育2h,再加入Ins和(或)AngII共同孵育。具體實驗可分三步:(1)通過細胞計數(shù)試劑盒8(Ce

4、ll Counting Kit-8, CCK-8)檢測藥物在24、48、72h時對HUVECs增殖能力影響;(2)通過實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction qRT-PCR)和蛋白質(zhì)印跡分析(Western-blot)檢測藥物處理24h時 COX-2 mRNA和蛋白表達水平;(3)用酶聯(lián)免疫吸附劑測定( enzyme linked immunosorb

5、ent assay,ELISA)檢測PGI2表達水平。
　　研究結(jié)果:
　　(1)HUVECs活性:與對照組相比,血脂康組在24h、48h時細胞增殖有所降低,而在72h時增加,但兩組無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),表明血脂康對HUVECs無細胞毒性作用;而在Ins組、AngII組、Ins+AngII組,相比于對照組HUVECs增殖明顯增加(P<0.05);且Ins+AngII組相比于Ins組和AngII組細胞增殖明顯增加(

6、P<0.05);在Ins+血脂康組、AngII+血脂康組和Ins+AngII+血脂康組相比于Ins組、AngII組和Ins+AngII組細胞增殖明顯降低(P<0.05);細胞在體外培養(yǎng)24、48、72h三個不同時間點發(fā)現(xiàn):Ins組、AngII組、Ins+AngII組、Ins+血脂康組、AngII+血脂康組和Ins+AngII+血脂康組的細胞均在24h增殖最明顯(P<0.05);
　　(2)COX-2 mRNA和蛋白表達結(jié)果:血脂康

7、組COX-2 mRNA和蛋白表達水平有所增加,但與對照組相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);Ins組、AngII組、Ins+AngII組相比于對照組,COX-2 mRNA和蛋白表達水平明顯上調(diào)(P<0.05);且在Ins+AngII組中相比于Ins組和AngII組,COX-2 mRNA和蛋白升高更顯著(P<0.01)。在Ins+血脂康組、AngII+血脂康組、Ins+AngII+血脂康組相比于對應(yīng)未加入血脂康的Ins組、AngII組、In

8、s+AngII組COX-2 mRNA和蛋白表則明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　(3) PGI2表達結(jié)果:血脂康組PGI2表達量明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);Ins組、AngII組、Ins+AngII組相比于對照組PGI2表達量明顯減少(P<0.05);且Ins+AngII組相比于Ins組、AngII組減少更為明顯(P<0.01);而在Ins+血脂康組、AngII+血脂康組、Ins+AngII+

9、血脂康組相比于Ins組、AngII組、Ins+AngII組PGI2表達量升高(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　通過體外實驗表明,AngII、Ins能促進細胞增殖,同時也能促進 HUVECs COX-2的mRN和蛋白表達,使得PGI2合成減少,且兩者具有協(xié)同作用;而血脂康能一定程度上抑制細胞增殖,同時也可使 AngII、Ins誘導(dǎo)的 HUVECs的COX-2的mRNA和蛋白表達上調(diào),PGI2合成水平增加。為研究AngII、高