蘿卜硫素對肺氣腫大鼠肺泡巨噬細胞分泌TNF-α的影響.pdf

1、目的：
　　探討蘿卜硫素（ Sulforaphane， SFN）對肺氣腫大鼠肺泡巨噬細胞（ alveolar macrophage，AM）分泌腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF-α）的影響。
　　方法：
　　1．肺氣腫大鼠模型構建：采用脂多糖聯(lián)合熏煙法構建模型。取SPF級成年雄性wistar大鼠18只，隨機分為對照組（6只）和模型組（12只）。模型組大鼠分別于d1、d14氣管內滴注200μ

2、g脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS；生理鹽水配制成200μg/200μL溶液)，第2~60天（除d14）在自制熏煙箱被動吸香煙，2次/日，12支/次，30min/次，持續(xù)8周；對照組大鼠以生理鹽水替代脂多糖行氣管滴注，正?？諝馕搿?周后，取各組大鼠右肺后葉做病理切片，HE染色光鏡下觀察，鑒定模型；2．原代肺泡巨噬細胞提取及干預：造模成功后，兩組大鼠均行支氣管肺泡灌洗（bronchoalveolar lavage,

3、BAL），取灌洗液行細胞計數，提取、純化AM，用不同濃度SFN（0μmol/L，5μmol/L，10μmol/L，20μmol/L）干預肺氣腫大鼠AM16 h。依處理方法不同，將AM分為五組：對照組、SFN0組、SFN5組、SFN10組和SFN20組；3．實驗室檢測：3.1采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測各組細胞培養(yǎng)上清液中TNF-α含量；3.2采用蛋白印跡法（Western blot）分別檢測各組AM中轉錄因子NF-E2相關因子

4、2（Nrf2）及其下游的靶基因醌氧化還原酶1（NQO1）、血紅素氧合酶-1（HO1）蛋白相對表達量；3.3采用western blot法、實時熒光定量PCR（qRT-PCR）法分別檢測各組AM中核因子（Nuclear factor，NF）-κB蛋白及其mRNA表達水平。
　　結果：
　　1.造模前對照組與模型組大鼠體重比較無明顯差異（211.97±8.71 g VS206.32±6.52 g，p＞0.05）。經熏煙8周后，模

5、型組大鼠體重較對照組顯著下降（567.48±24.38 g VS358.86±20.75 g，P<0.01）；2．模型組大鼠支氣管肺泡灌洗液（broncho alveolar lavage fluid，BALF）中白細胞總數及AM比例均較對照組顯著增加，分別為（2.79±0.42）×106/mL，（98.7±1.0）％和(0.77±0.16)×106/mL，（90.0±2.5）%（均P<0.001）；3．TNF-α在SFN各濃度組中含量

6、均高于對照組（對照組：12.2±2.7 pg/mL；SFN0:150.7±11.0 pg/mL；SFN5:133.1±13.7 pg/mL；SFN10:65.3±14.8 pg/mL；SFN20：48.2±11.1 pg/mL），且隨SFN干預濃度增加，TNF-α含量呈逐漸下降（均P<0.05）；4．與對照組相比，SFN0組Nrf2蛋白胞核表達減少，胞漿表達增加（均P<0.05），隨SFN干預濃度增加，Nrf2胞核表達量逐漸增加，胞漿相

7、應減少（均P<0.05）；5．與對照組相比，SFN0組NQO1、HO1蛋白表達減少；隨SFN干預濃度增加，NQO1、HO1蛋白表達逐漸增加（均P<0.05），且NQO1、HO1表達量與各組細胞培養(yǎng)上清液中TNF-α含量呈負相關（r=-0.918，P<0.01；r=-0.939，P<0.01）；6．對照組AM中NF-κB蛋白的胞漿表達大于胞核。與對照組相比，SFN0組NF-κB蛋白胞核表達顯著增加，胞漿表達減少（均P<0.05）；隨SFN

8、干預濃度增加，NF-κB胞核表達逐漸減少，胞漿表達相應增加（均P<0.05）；7．與對照組相比，SFN各濃度組NF-κB mRNA表達水平均高于對照組（均P<0.05），但SFN各濃度組間無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　　結論:
　　1．蘿卜硫素抑制肺氣腫大鼠肺泡巨噬細胞釋放TNF-α；2．蘿卜硫素通過促進Nrf2核內移，增加下游靶基因NQO1、HO1轉錄表達，從而抑制AM釋放TNF–α；3．蘿卜硫素通過減少NF-κB核內