肺氣腫大鼠全病程中膈肌功能的研究.pdf

1、目的：
　　 本研究應(yīng)用被動(dòng)吸煙復(fù)制大鼠肺氣腫模型，采用酶組織化學(xué)、免疫印記技術(shù)等不同的檢測(cè)方法，檢測(cè)肺氣腫大鼠全病程中的膈肌纖維類(lèi)型和mTor蛋白的變化，探討肺氣腫全病程中膈肌功能異常的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　 實(shí)驗(yàn)材料及方法：
　　 一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組
　　 選取7周齡健康雄性Wistar大鼠120只，體重250-280g，由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，清潔度Ⅰ級(jí)，常規(guī)飼料自由飲水，溫度22±1℃，濕

2、度50％左右，明/暗周期為12h。隨機(jī)被分為3組，分別為對(duì)照組（C）、肺氣腫吸煙組（E）、肺氣腫戒煙組（N），分別在肺氣腫形成0天、3月、6月、12月取材，每組10只。
　　 二、被動(dòng)吸煙復(fù)制大鼠肺氣腫模型
　　 將肺氣腫大鼠每天放入自制的煙熏艙（體積為0.25 m3），暴露于10支黃果樹(shù)牌香煙，每次被動(dòng)吸煙1小時(shí)5天/周，持續(xù)75天。
　　 三、主要實(shí)驗(yàn)方法
　　 （一）肺組織病理：HE染色
　　

3、 （二）膈肌纖維檢測(cè)：采用琥珀酸脫氫酶方法，將肌纖維分為氧化型和酵解型，其中染色深的是氧化型纖維，染色淺的酵解型纖維。
　　 （三）mTOR蛋白測(cè)定：Western Blotting
　　 四、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 所有數(shù)據(jù)用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料單因素方差分析進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，若P<0.05，再進(jìn)行q檢驗(yàn)，比較任意兩組間的差異有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用單因素直線回歸分析，比較干預(yù)因素與測(cè)量因素有

4、無(wú)相關(guān)性。所有分析用SPSS13.0軟件進(jìn)行。
　　 結(jié)果：
　　 1、在肺氣腫形成0天和3個(gè)月時(shí)，E組、N組的氧化型纖維比例高于對(duì)照組（P<0.05）。在肺氣腫形成6個(gè)月時(shí)，N組的氧化型纖維比例高于對(duì)照組（P<0.05），E組的氧化型纖維比例與對(duì)照組比較無(wú)顯著差異（P>0.05）。在肺氣腫形成12個(gè)月時(shí)，E組、N組的氧化型纖維比例低于對(duì)照組（P<0.05）。
　　 2、年齡與氧化型纖維比例的相關(guān)分析結(jié)果顯示正相

5、關(guān)（P<0.05）。
　　 3、在肺氣腫形成0天和3個(gè)月時(shí)，E組、N組的mTOR蛋白高于對(duì)照組（P<0.05）。在肺氣腫形成6個(gè)月時(shí)，N組的mTOR蛋白高于對(duì)照組（P<0.05），E組的mTOR蛋白與對(duì)照組比較無(wú)顯著差異（P>0.05）。在肺氣腫形成12個(gè)月時(shí)，E組、N組的mTOR低于對(duì)照組（P<0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1、肺氣腫大鼠膈肌氧化型纖維比例隨疾病進(jìn)展先增加后下降，說(shuō)明膈肌出現(xiàn)代償和失代償過(guò)程