瓜枝孢弱致病菌株誘導(dǎo)黃瓜抗病性分子機(jī)制的初步研究.pdf

1、生物因子誘導(dǎo)的植物抗病性是增強(qiáng)寄主抗病性的重要方法.與病毒相比,真菌、細(xì)菌弱致病菌及其誘導(dǎo)抗病機(jī)制的研究相對(duì)滯后.本論文以本實(shí)驗(yàn)室通過高溫誘導(dǎo)在國內(nèi)外首次篩選出的瓜枝孢(Cladosporium cucumernium)弱致病菌株為試材,采用.AFLP技術(shù)系統(tǒng)分析了瓜枝孢弱致病菌株基因組的變化,以及瓜枝孢弱致病菌株誘導(dǎo)黃瓜抗病的差異表達(dá),取得如下階段性進(jìn)展:1、通過瓜枝孢弱致病菌株誘導(dǎo)黃瓜抗病性的表型鑒定,進(jìn)一步驗(yàn)證了瓜枝孢弱致病菌株具

2、有穩(wěn)定的致弱性,能顯著提高黃瓜對(duì)黑星病的抗性,誘導(dǎo)抗病效果達(dá)77.01﹪.2、瓜枝孢弱致病菌株2R和3R的孢子比對(duì)應(yīng)強(qiáng)致病菌株2Q和3Q的孢子小,形態(tài)規(guī)則,孢子形狀呈橢圓形或近圓形,而對(duì)應(yīng)強(qiáng)致病菌株孢子形狀多種多樣,有梭形、近梭形、橢圓形及近圓形等形狀.3、AFLP技術(shù)可以有效揭示弱致病菌株:DNA水平的變異,瓜枝孢經(jīng)50℃高溫處理得到的弱致病菌株基因組發(fā)生了顯著的變化.256個(gè)AFLP引物組合在擴(kuò)增2R/2Q和3R/3Q時(shí)(2Q和3Q

3、為強(qiáng)致病菌株),分別產(chǎn)生2910和2216個(gè)DNA片段產(chǎn)生,2R與2Q以及3R與3Q的遺傳相似性分別為24.81﹪和43.68﹪.4、篩選并優(yōu)化了黃瓜cDNA-AFLP的PCR反應(yīng)體系及反應(yīng)程序.利用 cDNA-AFLP技術(shù)分析了瓜枝孢弱致病菌株誘導(dǎo)黃瓜抗病相關(guān)基因表達(dá)片段的時(shí)序特性:差異表達(dá)片段在弱致病菌株誘導(dǎo)后的9個(gè)時(shí)間點(diǎn)均有分布,弱致病菌株引發(fā)的一系列調(diào)控始于3h或更早,6h時(shí)呈現(xiàn)一個(gè)高峰,9h至24h期間變化不明顯,24h開始顯

4、著減少.5、獲得了經(jīng)Northern驗(yàn)證的瓜枝孢弱致病菌株誘導(dǎo)的4個(gè)特異DNA片段序列.BLAST分析結(jié)果顯示,4個(gè)特異DNA片段與Genbank中一些編碼誘導(dǎo)抗病相關(guān)基因的DNA序列有較高的同源性,主要包括梨ATP合酶γ基、黑麥抗病基因R1-5、擬南芥水楊酸葡糖基轉(zhuǎn)移酶、磷脂酶C等. 上述研究結(jié)果,在理論上將為進(jìn)一步深入研究瓜枝孢弱致病菌株的遺傳特性,以及進(jìn)一步克隆瓜枝孢弱致病菌株誘導(dǎo)抗病的相關(guān)基因奠定基礎(chǔ);在實(shí)踐上將為植物真