水體污染中常見食源性致病菌的PCR分子檢測(cè)研究.pdf

1、食源性致病菌是以食物為載體，導(dǎo)致人類發(fā)生疾病的細(xì)菌。針對(duì)傳統(tǒng)的細(xì)菌檢測(cè)方法，如生化培養(yǎng)、分離鑒定、免疫學(xué)技術(shù)等，操作繁瑣，需時(shí)長(zhǎng)、特異性不強(qiáng)、靈敏度不高等問題，本研究在進(jìn)行特異性引物設(shè)計(jì)后，建立起沙門氏菌(Salmonellasp.)、志賀氏菌(Shigellasp.)、銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、腸出血型大腸桿菌O157(EterohaemorrhagicEHEC)和副溶血弧菌(Vibriorahaem

2、olyticus)等5種致病菌的單重及多重PCR檢測(cè)技術(shù)，通過優(yōu)化測(cè)定條件，對(duì)10個(gè)屬的35株常見致病菌、條件致病菌和實(shí)驗(yàn)室人工污染的飲用水、河水、池塘水等樣本進(jìn)行檢測(cè)，這5種致病菌均有清晰、特異的預(yù)期條帶產(chǎn)生，并經(jīng)序列測(cè)定驗(yàn)證同源性，表明本研究建立的反應(yīng)體系及條件合適，篩選的引物高度特異。采用PCR技術(shù)對(duì)5種致病菌進(jìn)行檢測(cè)，每個(gè)樣品所需時(shí)間為5～8h，單重PCR技術(shù)檢測(cè)靈敏度分別為：腸出血型大腸桿菌O157100cfu.mL-1、志賀

3、氏菌100cfu.mL-1、副溶血弧菌101cfu.mL-1、銅綠假單胞菌100cfu.mL-1、沙門氏菌101cfu.mL-1；多重PCR技術(shù)檢測(cè)靈敏度分別為：腸出血型大腸桿菌O157101cfu.mL-1、志賀氏菌102cfu.mL-1、副溶血弧菌102cfu.mL-1、銅綠假單胞菌102cfu.mL-1、沙門氏菌101cfu.mL-1。相對(duì)于傳統(tǒng)檢測(cè)方法，本研究極大地縮短了檢測(cè)時(shí)間，適用于大通量樣品的檢測(cè)研究。此外，本研究在建立了