本地毛形線蟲49ku ES重組蛋白單克隆抗體的制備與鑒定.pdf

1、旋毛蟲病是一種嚴(yán)重的人獸共患寄生蟲病，其分布幾乎遍及全球各地。該病不僅嚴(yán)重危害人體健康，而且還給畜牧業(yè)及食品工業(yè)帶來重大的經(jīng)濟(jì)損失，所以及時(shí)準(zhǔn)確的診斷并治療旋毛蟲病顯得至關(guān)重要。 鑒于旋毛蟲病的危害性，研制敏感性高、特異性強(qiáng)的旋毛蟲病診斷試劑和保護(hù)性高的基因工程抗體，對(duì)于防治旋毛蟲病有重要的實(shí)際意義。本研究選用pET-30a表達(dá)載體表達(dá)本地毛形線蟲49ku ES抗原，利用雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體，為建立檢測(cè)旋毛蟲循環(huán)抗原方法和旋

2、毛蟲病早期診斷試劑盒及基因工程抗體的研制提供理想、必備的試驗(yàn)材料。 利用本地毛形線蟲49ku ES重組蛋白免疫Balb/C小鼠，取小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選分泌高滴度McAb雜交瘤細(xì)胞株，制備腹水進(jìn)行純化。采用間接ELISA方法測(cè)定雜交瘤細(xì)胞上清液和小鼠腹水效價(jià)；用Southern Biotechnology Associates，Inc的SBA Clonotyping<'TM>System/AP對(duì)單克隆抗體進(jìn)行亞類鑒定；

3、Dot-ELISA和Western blot試驗(yàn)檢測(cè)單克隆抗體的特異性；間接ELISA方法檢測(cè)單克隆抗體與日本血吸蟲成蟲抗原、豬囊尾蚴囊液抗原、豬蛔蟲抗原、豬鞭蟲抗原是否存在交叉反應(yīng)。結(jié)果表明：獲得兩株抗ES49ku ES重組蛋白雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為D5和C1；兩株雜交瘤細(xì)胞上清液和腹水效價(jià)均達(dá)到1∶1280和1∶12800；均能穩(wěn)定分泌敏感性強(qiáng)高、特異性強(qiáng)高的IgM類McAb，輕鏈為к鏈；兩株單克隆抗體均能特異性識(shí)別約49ku處的