自身免疫性骨髓衰竭癥患者淋巴細胞和CD34+細胞端粒長度研究.pdf

1、自身免疫性疾病(Autoimmune disease，AID)是一組由大量的自身抗體和自身反應性T細胞引起的自身免疫性疾病，其具體發(fā)病機制目前尚未明確，但T細胞啟動或介導的自身免疫異常仍是其發(fā)病的中心環(huán)節(jié)。端粒(Telomere)是線性染色體末端的特殊結構，功能是提供非轉錄DNA的緩沖物、阻止染色體DNA降解、末端融合、斷裂和重組，保護結構基因的完整，調節(jié)細胞生長，且與細胞凋亡、轉化、永生密切相關，其長度決定了細胞的生命周期，人類非癌性

2、細胞，在其增殖分化過程中，均不能阻止端粒的縮短。近年研究發(fā)現(xiàn)，在自身免疫性疾病中，存在細胞端粒長度的異?？s短。自身免疫性骨髓衰竭癥，是一類獲得性，由免疫因素介導的骨髓有核細胞增生低下，全血細胞減少性疾病，表現(xiàn)為貧血、出血和感染，包括以體液免疫功能亢進為主的自身抗體介導的免疫相關性全血細胞減少癥及以細胞免疫功能亢進為主的再生障礙性貧血。故本課題組主要包括了以下兩個方面的研究內容:
　　第一部分免疫相關性全血細胞減少癥患者淋巴細胞和C

3、D34+細胞端粒長度研究
　　目的:檢測免疫相關性全血細胞減少癥（immuno-related pancytopenia，IRP）患者外周血CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T、CD19+B淋巴細胞及骨髓CD34+細胞端粒長度變化并且分析其與病情的相關性，探討其在IRP免疫發(fā)病機制中的作用。
　　方法:研究對象為40例初治IRP患者，以38名同種族、同地區(qū)、性別、年齡階段相似的健康志愿者作為正常對照組，應用免疫

4、磁珠方法分選外周血CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T、CD19+B及骨髓CD34+細胞，以流式細胞術-熒光原位雜交技術(FLOW-FISH)檢測端粒相對長度。
　　結果:
　　1、初治IRP患者外周血CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T細胞端粒相對長度分別為(27.7544±16.3229)％、(7.5257±3.7453)％、(25.8543±14.7887)％，與健康志愿者[(54.5549

5、±19.7822)％、(12.0958±2.8048)％、(38.3670±4.6257)％]比較明顯縮短(P＜0.05); IRP患者外周血CD19+B淋巴細胞端粒相對長度為(22.1360±16.1415)％，與健康志愿者(42.8457±16.3533)％比較顯著縮短(P＜0.01); IRP患者骨髓CD34+細胞端粒相對長度為(22.5284±21,6009)％,與健康志愿者(23.9364±19.8224)％比較差異無統(tǒng)計學意

6、義(P＞0.05)。
　　2、B淋巴細胞端粒相對長度與外周血白細胞計數(shù)呈正相關(r=0.706，P=0.015)，而與疾病的嚴重程度呈負相關(r=-0.613，P=0.045)，與治療效果呈正相關(r=0.775,P=0.005)。
　　結論:初治IRP患者存在CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T、CD19+B細胞端粒長度的縮短，且與IRP患者的白細胞計數(shù)、疾病嚴重程度及治療效果密切相關，骨髓CD34+細胞端粒

7、長度無明顯異常，提示端粒長度的變化在IRP的免疫發(fā)病機制中可能發(fā)揮了重要作用，且進一步證實了IRP為一種后天獲得性自身免疫性疾病，而非先天性克隆性疾病。這種端粒長度的異常，為探索臨床治療靶點及尋找新的預防及治療方案提供了線索。
　　第二部分重型再生障礙性貧血患者淋巴細胞和CD34+細胞端粒長度研究
　　目的:檢測重型再生障礙性貧血(Severe aplastic anemia，SAA)患者外周血CD3+、CD3+CD4+、C

8、D3+CD8+、CD19+淋巴細胞及骨髓CD34+細胞端粒長度的變化在重型再生障礙性貧血(SAA)發(fā)病機制中的作用及分析其與病情的相關性。
　　方法:選取29例初治SAA患者為研究對象，以32名同種族、同地區(qū)、性別、年齡階段相似的健康志愿者為對照，應用免疫磁珠方法分選外周血CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T、CD19+B淋巴細胞及骨髓CD34+細胞，以流式細胞術-熒光原位雜交技術(FLOW-FISH)檢測端粒相對長

9、度。
　　結果:
　　1、初治SAA患者外周血CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T細胞端粒相對長度分別為(21.0376±15.3885)％、(8.2019±2.7142)％、(16.0670±11.7219)，與健康志愿者比較[(54.5549±19.7822)％、(13.6251±1.5533)(38.7257±2.8303)％]，明顯縮短(P＜0.01);初治SAA患者外周血CD19+B淋巴細胞端粒相對長

10、度為(40.6227±16.3068)％，與健康志愿者(42.8457±16.3533)％比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);初治SAA患者骨髓CD34+細胞端粒相對長度為(25.6248±19.8564)％，與健康志愿者(23.9364±19.8224)％比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　2、CD3+CD8+T細胞端粒相對長度與臨床表現(xiàn)嚴重程度呈負相關(r=-0.791，P=0.034)，而與白細胞計數(shù)、血紅蛋白水平、血