骨髓CD34+干細胞向內皮細胞分化的實驗研究.pdf

1、目的：分離和培養(yǎng)犬骨髓CD34＋細胞，研究其向內皮細胞分化的生物學特性，并種植于小口徑人工血管支架內表面，觀察內皮化效果。
　　 方法：⑴抽取犬骨髓，F(xiàn)icoll液分離單個核細胞(MNCs)，免疫磁珠分離CD34＋細胞，流式細胞儀檢測細胞純度，DMEM液培養(yǎng)，內皮細胞生長因子(VEGF)誘導分化，行CD31、vWF(Ⅷ因子)免疫熒光、免疫組織化學、Dil-Ac-LDL吸收實驗、體外成血管實驗鑒定細胞特性和功能。⑵將誘導的CD34

2、＋細胞種植于人工小血管支架內表面，人工小血管置換一段犬頸動脈，構建動物模型。掃描電鏡觀察細胞在人工血管腔面的分布和生長情況。
　　 結果：①經流式細胞儀測定，免疫磁珠方法分離的細胞中CD34＋細胞含量為 78.46±6.37[％]。經免疫磁珠分離獲得的骨髓CD34＋細胞在倒置顯微鏡下為折光性強的圓形細胞，大小均一，24h后觀察開始出現(xiàn)貼壁細胞，呈圓形，隨后逐漸伸出偽足，倒置顯微鏡下剛貼壁的細胞呈典型的“鵝卵石”狀，細胞形態(tài)逐漸演

3、變成梭型，兩周后細胞基本鋪滿培養(yǎng)瓶底面。②免疫熒光、免疫組織化學結果示CD31和vWF表達均為陽性，Dil-Ac-LDL吸收功能實驗陽性，體外成血管實驗陽性，證明CD34＋被成功誘導向內皮細胞分化。③掃描電鏡觀察分化的內皮細胞在人工血管支架內表面的種植情況，可見大量內皮細胞粘附于人工血管內表面，細胞形態(tài)伸展，連續(xù)性較好，有偽足伸出并長入血管內表面微孔內。
　　 結論：⑴免疫磁珠方法可分離得到高純度的骨髓CD34＋細胞，且CD34