抗人腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)志物7（TEM7）膜外段單克隆抗體的制備及TEM7蛋白在部分腫瘤組織中的定位研究.pdf

1、目的:制備特異性抗人腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)志物7(TEM7)膜外段單克隆抗體;利用制備的抗人TEM7膜外段單克隆抗體通過(guò)免疫組織化學(xué)ABC的方法,初步觀察TEM7蛋白在部分不同來(lái)源的腫瘤及癌旁正常組織中的定位表達(dá)情況,為以TEM7為靶標(biāo)的腫瘤抗血管治療提供必要的理論依據(jù).方法:利用PCR的方法,將TEM7膜外段cDNA重組到原核表達(dá)載體pET-32b中,在大腸桿菌BL21(DE3)中表達(dá).目的蛋白經(jīng)離子吸附層析純化后免疫雌性Balb/c小鼠,傳

2、統(tǒng)的雜交瘤融合技術(shù)制備抗人TEM7膜外段單克隆抗體.以酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)、Western blot篩選及鑒定分泌特異性抗人TEM7膜外段單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株.最后采用免疫組織化學(xué)ABC法,分別對(duì)70例不同來(lái)源的腫瘤及癌旁正常組織進(jìn)行TEM7蛋白定位表達(dá)的研究.結(jié)果:制備了抗人TEM7膜外段的單克隆抗體,經(jīng)過(guò)Western blot鑒定具有較高的特異性.對(duì)腫瘤及癌旁正常組織免疫組織化學(xué)ABC染色的結(jié)果可見(jiàn)TEM7蛋白定位于

3、:大腸癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、肝細(xì)胞癌、腎細(xì)胞癌和前列腺癌的血管內(nèi)皮細(xì)胞;大腸癌、胃癌、乳腺癌、肺癌和肝細(xì)胞癌的腫瘤細(xì)胞;大腸癌、胃癌和乳腺癌的血管平滑肌細(xì)胞;胃癌的胃壁平滑肌細(xì)胞;肝細(xì)胞癌的膽管上皮細(xì)胞.結(jié)論:成功制備了特異性的抗人TEM7膜外段單克隆抗體;TEM7基因的蛋白表達(dá)產(chǎn)物在腫瘤組織中并非特異性地定位于腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞,還可見(jiàn)于腫瘤組織的癌細(xì)胞中,甚至在正常組織中也有表達(dá).我們的結(jié)果與2000年約翰霍普金斯大學(xué)腫瘤研究中心的