抗人肝癌標(biāo)志物MXR7單克隆抗體的制備與臨床應(yīng)用研究.pdf

1、第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文抗人肝癌標(biāo)志物MXR7單克隆抗體的制備與臨床應(yīng)用研究姓名：吳秀菊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：王紅陽(yáng);吳孟超2002.5.1蔓三! 墾查竺! 查竺竺塑奎 一．一—————————————————————————————————————————一中文摘要 R 7 j 77( 原發(fā)性肝細(xì)胞癌( H e p a t o c e l l l l l a rc a r c i n o m a ，H

2、C C ) ，簡(jiǎn)稱肝癌，是惡性腫瘤中對(duì)人體造成嚴(yán)重威脅，死亡率很高的疾病。目前，就世界范圍而言，其發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，手術(shù)切除仍是主要的治療手段。作為一種高死亡率的疾病，肝癌的病因、發(fā)生發(fā)展、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移以及診斷和治療都越來(lái)越引起人們的關(guān)注。其中，肝癌的早期診斷是提高總體療效的關(guān)鍵，同時(shí)對(duì)于患者的轉(zhuǎn)歸以及預(yù)后都具有十分重要的意義【㈨。在腫瘤的臨床研究和實(shí)踐中，早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療是延長(zhǎng)病人生存期的關(guān)鍵。腫瘤標(biāo)志物( T u m o

3、r m a r k e r ，T M ) 在腫瘤普查、診斷、判斷預(yù)后和轉(zhuǎn)歸、評(píng)價(jià)治療療效和高危人群隨訪觀察等方面都具有較大的臨床實(shí)用價(jià)值‘7 ．9 】。自8 0 年代以來(lái)，隨著應(yīng)用B 淋巴細(xì)胞雜交瘤制備腫瘤單克隆抗體技術(shù)的不斷成熟，出現(xiàn)了大量抗腫瘤的單克隆抗體，并與同時(shí)出現(xiàn)_ t E E ] 新月異的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)( R I A 、I R M A 、E L I S A 、C L I A 、I F A 、T R F I A 等) 相結(jié)合，

4、發(fā)展了眾多的腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)項(xiàng)目并不斷地結(jié)合應(yīng)用于l | 每床，已成為腫瘤普查、早診和隨訪的一個(gè)重要檢查指標(biāo)。M X R 7 基因是1 9 9 5 年L a g e 等人通過(guò)差異雜交方法從抗米托蒽醌的人胃癌細(xì)胞系分離克隆的【l o 】。隨后，我們?cè)谘芯扛伟┨禺愋悦舾袠?biāo)志基因時(shí)，從肝癌c D N A文庫(kù)分離得到M X R 7 基因。該基因全長(zhǎng)c D N A 序列為2 2 6 3 b p ，定位于人染色體X q 2 6 ，由8 個(gè)外顯子組成，

5、編碼由5 8 0 個(gè)氨基酸組成的硫酸肝素類蛋白聚糖( H e p a r a ns u l f a t ep r o t e o g l y c a n s ，H S P G ) ，分子量6 6k D a ，通過(guò)糖基磷脂酰肌醇( O b c o s y l ．p h o s p h a t i d y l i n o s i t o l ，G P I ) 錨連接于細(xì)胞膜，屬于蛋白聚糖家族。該基因大量表達(dá)于胎盤(pán)以及胎兒肝臟、肺臟和腎臟，被

6、認(rèn)為參與發(fā)育期形態(tài)發(fā)生和生長(zhǎng)調(diào)控。我們的研究與文獻(xiàn)報(bào)道均表明，M X R 7 與肝癌的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。另外，由于M X R 7 在肝癌的惡性進(jìn)展中的表達(dá)水平逐漸增高，使之可能成為用于判斷肝癌的預(yù)后或抗肝癌轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的重要的靶基因。因此，M X R 7 基因己成為一個(gè)潛在的具有重要臨床應(yīng)用價(jià)值的新的肝癌標(biāo)志物[ 1 1 - 1 3 1 。夕‘本研究的第一部分，是抗原純化。我們從人胎盤(pán)c D N A 中克隆了5 ’端缺失瑚如m 耽婦括嘲