抗WSSV卵黃抗體的制備及其對對蝦白斑病防治效果的研究.pdf

1、白斑綜合癥(White Spot Syndrome,WSS)是近十余年來對蝦養(yǎng)殖中危害最大和造成經(jīng)濟(jì)損失最嚴(yán)重的疾病，至今缺乏有效的治療措施。本文首次系統(tǒng)利用卵黃抗體人工被動免疫法對該病的預(yù)防與應(yīng)急治療進(jìn)行了探索。 為了獲得足量的WSSV抗原，本文以感染W(wǎng)SSV的對蝦前腸和鰓等組織為材料，分別利用差速離心法和蔗糖密度梯度離心法進(jìn)行了WSSV的分離純化，結(jié)果表明：利用差速離心法雖然能夠使所分離的WSSV的完好率達(dá)70％左右，但其中

2、雜質(zhì)較多，病毒粒子的收獲量較少；利用蔗糖密度梯度離心法提取WSSV，雖然其完好率稍低于差速離心法，但也可以達(dá)到60％以上，并且，所得到的WSSV的量要大大高于差速離心法，適合于WSSV的大量分離。 為了獲得制備抗WSSV卵黃抗體的合適方法，本文利用提純的WSSV分別制備了福氏佐劑WSSV活疫苗、水溶性蜂膠佐劑WSSV活疫苗、白油佐劑WSSV活疫苗、氫氧化鋁佐劑WSSV活疫苗、福氏佐劑WSSV滅活疫苗以及不用佐劑的WSSV活疫苗，

3、分別采用翅膀基部肌肉多點(diǎn)注射接種和頸部皮下注射接種2種方式對海蘭褐殼蛋雞(Hy-Line Brown)進(jìn)行免疫接種，并采用微量血凝抑制實(shí)驗(yàn)對血清和卵黃中的抗體進(jìn)行檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明： (1)通過制備合適的WSSV疫苗接種母雞，可以獲得較高抗體效價(jià)的抗WSSV卵黃抗體； (2)就本研究使用的各種疫苗的免疫效果而言，使用活WSSV比使用滅活WSSV的效果好，使用佐劑比不使用佐劑的效果好，本實(shí)驗(yàn)所使用的4種佐劑免疫效果由強(qiáng)到弱

4、的順序依次為：福氏佐劑和水溶性蜂膠佐劑、白油佐劑、氫氧化鋁佐劑； (3)就本研究使用的兩種接種方法的免疫效果而言，頸部皮下注射接種要明顯優(yōu)于翅膀基部肌肉多點(diǎn)注射接種； (4)在第一輪免疫所產(chǎn)生的抗WSSV抗體水平下降后，若以相同的抗原和相同的方法再進(jìn)行了第二輪免疫，可以使抗WSSV抗體效價(jià)再次升高，并且，第二輪免疫出現(xiàn)的抗體效價(jià)最高值比第一輪免疫產(chǎn)生的抗體效價(jià)最高值還要高，使持續(xù)獲得大量高效價(jià)抗WSSV卵黃抗體成為可能；

5、 (5)卵黃抗體可以在低溫下以卵黃液的形式或卵黃抗體提取液的形式保存，并且，溫度越低的保存效果越好；以卵黃抗體提取液的形式保存比以卵黃液的形式保存效果好； (6)在以WSSV接種母雞后，除在其所產(chǎn)雞蛋卵黃中可以獲得高效價(jià)抗WSSV抗體外，在其所產(chǎn)雞蛋的蛋白中也可獲得較高效價(jià)的抗WSSV抗體，在同一個(gè)雞蛋中，后者的抗體效價(jià)僅比前者的抗體效價(jià)低約1個(gè)滴度。 (7)在本文所研究的各種方法中，以皮下注射福氏佐劑WSSV活

6、疫苗獲得的抗WSSV卵黃抗體效價(jià)最高，第一輪接種獲得的最高抗WSSV卵黃抗體效價(jià)為1:640，第二輪接種獲得的最高抗WSSV卵黃抗體效價(jià)為 1:896。 以所制備的卵黃抗體對對蝦白斑病的預(yù)防與治療研究結(jié)果表明：以不同WSSV 疫苗接種母雞制備的卵黃液雖然其抗WSSV卵黃抗體效價(jià)相差較大，但在2％的投喂?jié)舛认?，對預(yù)防和治療對蝦白斑病都有十分良好的效果。若以抗WSSV卵黃抗體效價(jià)為 1:448的卵黃液拌料投喂感染W(wǎng)SSV的實(shí)驗(yàn)對蝦，