香榧嫁接過程中ARF功能及轉(zhuǎn)錄組測序初步分析.pdf

1、香榧（Torreya grandis‘Merrillii’）為榧樹（Torreya grandis）中經(jīng)人工選育后嫁接繁殖栽培的優(yōu)良品種。香榧種子是中國特有的珍稀干果，是山區(qū)農(nóng)民的主要經(jīng)濟來源之一。目前香榧栽培存在幼苗生長緩慢，造林成活率低等問題。嫁接作為一種廣泛應(yīng)用的園藝手段，可以擴大香榧的栽培規(guī)模，提高造林成活率。本文以香榧嫁接苗為試驗材料，通過不同植物生長調(diào)節(jié)劑和遮蔭處理，研究不同處理、嫁接不同部位的內(nèi)源激素含量，克隆香榧的生長素

2、響應(yīng)因子ARF，篩選嫁接相關(guān)的代謝通路，分析香榧嫁接過程中ARF基因家族的表達變化，為揭示ARF調(diào)控香榧嫁接的分子機制提供一定的理論參考。主要研究結(jié)果如下:
　　1、利用酶聯(lián)免疫法測定植物內(nèi)源激素含量的變化，測定指標(biāo)為IAA、GA、CTK、ABA四項，發(fā)現(xiàn)隨著嫁接時間的延長，對照組中IAA和GA含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，ABA含量呈現(xiàn)先下降后上升趨勢而CTK含量則逐漸上升;外施IAA一定程度上誘導(dǎo)內(nèi)源CTK，GA和IAA含量表達

3、增加，而ABA含量減少;外施NPA則使四項激素含量都明顯下降，表明外施NPA對激素表達有抑制作用;遮蔭處理條件下，ABA和GA的含量有一定的提升，但CTK和IAA的含量總體有所下降。
　　2、克隆得到TgARF cDNA開放閱讀框全長為2676bp，預(yù)測編碼891個氨基酸，與15個植物的ARF基因比較，發(fā)現(xiàn)與挪威云杉的親緣關(guān)系最近，其次是黃杉。
　　3、利用qRT-PCR研究TgARF基因在不同處理下轉(zhuǎn)錄水平的變化，發(fā)現(xiàn)對照

4、組接穗中TgARF基因在嫁接后3天表達量下降，嫁接后7天上升并達到最大值，14天又下降;在砧木中則呈現(xiàn)穩(wěn)定上升趨勢，在嫁接后14天表達量達到最大值。激素和遮蔭處理對TgARF基因的表達也存在一定影響，遮蔭處理明顯加大了表達量的變化幅度。
　　4、基于轉(zhuǎn)錄組分析香榧嫁接過程中基因的表達變化，共得到17.8億個短片段，拼接得370391個獨立基因;對表達的差異基因進行分析，分別在嫁接7天和14天的樣本中發(fā)現(xiàn)84468和135625個差