山核桃水通道蛋白CcPIP1在山核桃嫁接過程中的功能初步研究.pdf

1、山核桃(Carya cathayensis Sarg.)重要的木本油料植物，是我國特有的名優(yōu)干果和木本油料植物，具有很高的經(jīng)濟價值。嫁接是解決山核桃園藝化、良種化栽培的重要手段。水是植物細胞的重要組成成分，植物水通道蛋白是細胞間和細胞內(nèi)水分快速運輸?shù)闹饕ǖ?，作為植物水通道蛋白的一個亞類，質(zhì)膜內(nèi)在蛋白PIPs定位于原生質(zhì)膜，為典型的高水分選擇性通道蛋白。本文以不同處理的山核桃嫁接苗為材料，通過克隆山核桃CcPIP1啟動子序列，利用定量R

2、T-PCR等方法對山核桃水通道蛋白進行表達特性和功能的研究，主要研究結(jié)果如下：
　　 ⑴利用改良的CTAB法提取的嫁接樣品總RNA質(zhì)量高、完整性好、無雜質(zhì)，利用SMARTTM PCR cDNA Synthesis Kit反轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA，完整性好，滿足實驗要求。
　　 ⑵根據(jù)已獲得的CcPIP1基因的cDNA，在cDNA5'端設計反向特異引物WK1、WK2、WK3，以DNA酶切產(chǎn)物為模板，通過染色體步移法獲得了CcP

3、IP1基因上游部分序列，該序列全長為876bp。PlantCARE和PLACE等在線軟件分析表明:該序列具有真核生物啟動子序列的一般特征，2個CAAT box，7個TATA box和1個G-box。此外還找到了其他各類調(diào)控元件。
　　 ⑶利用定量RT-PCR技術(shù)，對不同處理(空白對照，50μ M ABA，100mM NaCl，250mM甘露醇，和5mM DTT)在不同嫁接時期(0d，1d，3d，5d，7d，14d)山核桃CcPI

4、P1基因的表達進行分析。結(jié)果表明:在對照中，山核桃CcPIP1基因的表達量從嫁接前到嫁接后3d急劇下降，在隨后的4d里，該基因的表達量在接穗中上升明顯，然后下降。在砧木中，嫁接1d后，該基因表達量急劇下降，在隨后的6d里表達量上升明顯。嫁接7d后，CcPIP1基因的轉(zhuǎn)錄水平達到最高，然后下降。無論在砧木還是在接穗中，嫁接后7d達到最高。通過ABA處理和NaCl處理山核桃CcPIP1基因的表達量的變化模式與對照相似。但與對照相比，NaCl

5、處理的山核桃CcPIP1基因的表達量明顯降低，而ABA處理的山核桃CcPIP1基因的表達量明顯升高。通過DTT處理，CcPIP1基因的表達量在接穗和砧木中的表達模式都是先下降后上升。無論在砧木中還是在接穗中，嫁接1d后，CcPIP1基因的表達量急劇下降，在隨后的13d時間里，基因的表達量逐漸上升，并于嫁接后14d達到最高。但是通過甘露醇處理可以看出，CcPIP1基因的表達量無論是在砧木還是接穗中都沒有一定的規(guī)律。
　　 ⑷通過測

6、定不同處理(空白對照，50μ M ABA和5mM DTT)不同嫁接時期(0d，1d，3d，5d，7d，14d)的山核桃相對電導率，結(jié)果表明:在對照中，山核桃砧木和接穗的相對電導率在嫁接過程中逐漸下降。嫁接前，接穗的相對電導率為51.7％，到14d，相對電導率下降為39.2％。嫁接后，砧木的電導率變化較大，變化幅度在33％-72％之間。在ABA處理中，接穗和砧木的相對電導率在嫁接前分別為51.7％和45.4％，隨后的時間里，相對電導率下降