博萊霉素致肺纖維化大鼠ET-1、6-keto-PGF-,1α-、vWF表達(dá)及意義.pdf

1、目的：特發(fā)性肺纖維化(IPF)是特發(fā)性間質(zhì)性肺炎(IIP)中病理表現(xiàn)為普通型間質(zhì)性肺炎(UIP)的一種類型，是IIP中最常見的一種，占47％～71％。IPF是以成纖維細(xì)胞增殖及細(xì)胞外基質(zhì)沉積為特征，其主要病理特征包括肺泡上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞及基底膜的損害，伴有嗜中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤的炎癥，以及肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞的增生，膠原沉積。目前IPF發(fā)病率與病死率均呈上升趨勢，其最常見死亡原因是呼吸衰竭，其他還包括心力衰竭

2、、缺血性心臟病、感染和肺栓塞等疾病。IPF確切的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，一般認(rèn)為早期病理改變?yōu)榉螕p傷，晚期為肺纖維化，但在眾多細(xì)胞因子及生物介質(zhì)參與IPF的炎癥及纖維化過程中，內(nèi)皮細(xì)胞的作用已逐漸受到重視。本文旨在探討博萊霉素致大鼠肺纖維化模型內(nèi)皮細(xì)胞損傷、血栓前狀態(tài)的變化，研究內(nèi)皮細(xì)胞損傷時(shí)釋放的因子內(nèi)皮素-1(ET-1)、6-酮．前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)、血管性假血友病因子(vWF)的變化及其相互關(guān)系。 材料與方

3、法：選取體重220±10g的清潔級(jí)健康、雄性SpragueDawley(SD)大鼠(由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)48只，隨機(jī)分為兩組：博萊霉素(bleomycin，BLM)組與生理鹽水(normalsodium，NS)組，每組均為24只大鼠，每組再按第3、7、14、28天時(shí)間段隨機(jī)分為四個(gè)小組，各小組均為6只SD大鼠。兩組動(dòng)物均在無菌條件下操作，用10g／L水合氯醛(40mg/kg)腹腔注射麻醉，作頸正中切口，充分暴露氣管，經(jīng)環(huán)狀軟骨下氣

4、管間隙穿刺向氣管內(nèi)緩慢注入藥液(模型組注入含BLMA55mg／Kg的生理鹽水，而正常對(duì)照組注入單純的生理鹽水)0.2ml～0.3ml，將大鼠直立并輕輕旋轉(zhuǎn)動(dòng)物，使藥液在肺內(nèi)分布充分、均勻。兩組動(dòng)物在造模后第3、7、14、28天分別于心臟取血、抗凝、離心、取上清液，左肺用2.5ml×5次生理鹽水做支氣管肺泡灌洗(回收率＞80％)，離心取上清液。所有上清液分裝后放入-70℃保存。將右肺浸泡于10％中性甲醛溶液中固定，做常規(guī)石蠟切片，HE染色

5、觀察肺泡炎癥，Masson染色觀察肺內(nèi)膠原，并按Szapiel進(jìn)行病理分級(jí)，觀察肺泡炎和肺纖維化的動(dòng)態(tài)變化。分別采用放射免疫與酶聯(lián)免疫吸附方法按照說明書測定血漿和支氣管肺泡灌洗液中ET-1、6-keto-PGF1a、vWF的含量。采用SPSS11.5版統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。 結(jié)論：(1)用博萊霉素致大鼠肺纖維化的動(dòng)物模型是成功的。(2)ET-1、6-keto-PGF1a、vWF均可作為內(nèi)皮細(xì)胞損傷的標(biāo)志物，本研究結(jié)果顯示肺纖維化存在