恩度對不同狀態(tài)內(nèi)皮細胞及相應標記物的影響.pdf

1、目的：檢測恩度(rh-endostatin)對不同長狀念的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(Human umbilicalveinentheiail cell,HDVEC)的抑制作用，以及對其表面分子標志物的影響，研究二得的內(nèi)在聯(lián)系并深入研究恩度的作用機制。 方法： 1、制備三種生長狀態(tài)的HUVEC細胞。應用流式細胞術分別檢測剛貼壁細胞、對數(shù)生長期細胞及經(jīng)不剛濃度TNF-α激活的HUVEC細胞的分子表面標志物CD146、CD105、CD

2、62E的變化情況。 2、檢測恩度作用子不同生長狀態(tài)的內(nèi)皮細胞后的標記物變化情況。應用流式細胞術檢測恩度作用于剛壁細胞、對數(shù)生長期細胞子及經(jīng)不同濃度TNF-αl用的HUVEC細胞的分子表面標志物CD105、CD146、CD62E的變化情況。 3、應用SPSS11.5軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，探討各表面標記物與細胞生長的不同狀態(tài)、及其經(jīng)恩度作用后的變化與其不同作用濃度和時間的關系。 結(jié)果：恩度作用前 HUVEC表

3、面分子標志物的檢測結(jié)果：(1)剛貼壁HCVEC細胞：CD105隨貼壁時間延長而增加，經(jīng)單因素方差分析，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；CD62E不隨貼時間變化(P>0.05)。(2)對數(shù)生長期HUVEC細胞：CD146、CD105呈持續(xù)穩(wěn)定地高表達，CD62E呈低表達。(3)經(jīng)不同濃度TNF-α作用的HUVEC細胞：CD146仍呈持續(xù)的高表達，與對數(shù)生長期的比較，無顯著性差異(P>0.05)：CD105在6h內(nèi)隨濃度增加下調(diào)，單因素方差分

4、析，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，經(jīng)過24h又回調(diào)至對數(shù)生長期時的高水平；CD62E6h內(nèi)隨濃度增加漸升高，在250IU/ml處達峰值，單因素方差分析，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，經(jīng)過24h又回調(diào)至對烽生長期時的低水平。恩度作用后HUVEC表面分子標志物的檢測結(jié)果：(1)CD105的變化：剛貼壁HUVEC細胞、對數(shù)生長期細胞、經(jīng)TNF-α250IU/ml作用6h后細胞其表達均隨恩度的作用濃度及時間變化，經(jīng)單因素方差分析，有統(tǒng)計學意義(

5、P<0.05)。(2)CD62E的變化：只在經(jīng)TNF-α 250IU/ml作用6h后細胞組在恩度作用24h時間段內(nèi)隨恩度濃度增加下調(diào)，單因素方差分析，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，其余各組均無顯著性差導異(P>0.05)。 結(jié)論： 1、CD146是所有血管內(nèi)皮細胞所具有的共同標記、可能分別表達在"靜止"和"活化"兩種內(nèi)皮細胞表面，高濃度的TNF“激活作用”也不能使其發(fā)生明顯變化。 2、CD105在僅經(jīng)生理濃度的血

6、清因子刺激后即可明顯上調(diào)、表達于具有增殖及粘附功能的內(nèi)皮細胞表面，可能至少反映了活化狀念中的增殖及粘附能力，對外界刺激反應敏感、變化快，可能是反映內(nèi)皮細胞活化狀態(tài)的早期標記。 3、CD62E只表達經(jīng)高于生理濃度的TNF激活的內(nèi)皮細胞表面、可能至少反映了活化狀態(tài)中粘附、遷移能力，且僅對外界高濃度刺激因子產(chǎn)生應答、變化較慢，可能是反映內(nèi)皮細胞活化狀念的晚期標記。 4、一定濃度的內(nèi)皮抑素可能不足以誘導內(nèi)皮細胞凋亡，卻可以明顯抑