利迪鏈菌素L-玫紅糖合成基因的克隆與功能分析.pdf

1、利迪鏈菌素是由利迪鏈霉菌產(chǎn)生的脂鯉酸類抗生素，具有抑制細菌RNA合成的活性。利迪鏈菌素在其生物合成的后期被L-玫紅糖糖基化。L-玫紅糖是6-脫氧己糖家族中的一種2,3,6-三脫氧糖。和所有的6-脫氧己糖家族成員一樣，L-玫紅糖生物合成的前兩步為由葡萄糖形成NDP-D-葡萄糖，再發(fā)生一步脫水反應，形成NDP-4-酮-6-脫氧-D-葡萄糖。這兩步反應是分別由NDP-己糖合成酶及NDP-D-葡萄糖-4,6脫水酶催化的。 本文比較了已知

2、的五種抗生素中L-玫紅糖NDP-D-葡萄糖-4,6脫水酶編碼基因，設計引物，在對PCR反應體系進行優(yōu)化的基礎上，獲得了長度為724bp的基因片斷Lidl。數(shù)據(jù)庫檢索結果顯示它與NDP-D-葡萄糖-4,6脫水酶編碼基因同源性很高。 在比較五種抗生素中L-玫紅糖的生物合成基因簇結構后發(fā)現(xiàn)，NDP-己糖合成酶編碼基因都位于NDP-D-葡萄糖-4,6脫水酶編碼基因的上游，在其中四種抗生素中，它們的位置相鄰。在設計適當?shù)囊镞M行PCR擴增

3、后得到一段長度為1234bp的基因片斷Lid2。數(shù)據(jù)庫檢索結果表明該片斷的前500bp與NDP-己糖合成酶編碼基因有很高的同源性。而后724bp片段則與基因片段Lidl一致。將這兩個基因命名為lidY及l(fā)idH。生物信息學分析表明，這兩個基因分別編碼NDP-D-葡萄糖-4,6脫水酶和NDP-己糖合成酶。實驗結果表明在利迪鏈菌素的生物合成基因簇中，NDP-己糖合成酶編碼基因位于NDP-D-葡萄糖-4,6脫水酶編碼基因上游且位置相臨。