蕙蘭CfCIN基因克隆及其功能分析.pdf

1、蕙蘭（Cymbidium faberi Rolfe）又名多花蘭、夏蘭等，為蘭科(Orchidaceae)蘭屬（Cymbidium）草本植物，原產(chǎn)于中國，是我國栽培最久和最普及的蘭花之一。蕙蘭花小巧精致、芬芳四溢，觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值極高，深受人們喜愛。長期的自然選種使蕙蘭野生資源遭到破壞嚴(yán)重，且雜交育種、誘變育種具有周期長等缺點(diǎn)，均不能滿足市場需求，而基因工程技術(shù)具有目的性強(qiáng)、育種周期短、可克服遠(yuǎn)緣雜交不親和障礙等優(yōu)點(diǎn)，因此成為培育蕙蘭新

2、品種的重要手段。目前，國內(nèi)外對(duì)蕙蘭的研究報(bào)道較少，關(guān)于蕙蘭基因工程育種方面的研究亦不多。本研究以蕙蘭為試驗(yàn)材料，運(yùn)用基因工程手段分離了蕙蘭TCP基因，分析了其序列特征，構(gòu)建載體轉(zhuǎn)化并對(duì)非洲紫羅蘭轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行了性狀鑒定，初步闡述了其功能。為培育蘭屬植物新品種資源提供了理論依據(jù)。本研究主要試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.以蕙蘭為材料，采用Trizol法提取總RNA，通過RT-PCR、RACE技術(shù)從蕙蘭中分離得到TCP家族基因CfCIN的cD

3、NA全長序列，并對(duì)其序列特征進(jìn)行分析。結(jié)果表明，CfCIN基因全長為1188bp，開放閱讀框(ORF)為1161bp，編碼386個(gè)氨基酸。與其它物種的TCP氨基酸序列比對(duì)顯示，CfCIN與蝴蝶蘭、石斛蘭等高度同源，均包含TCP基因家族功能保守域:TCP-domain。系統(tǒng)聚類分析預(yù)測該蛋白質(zhì)屬于CIN亞族類蛋白質(zhì)。
　　2.通過對(duì)植物載體pCAMBIA1302及CfCIN基因的酶切位點(diǎn)分析，選用限制性內(nèi)切酶BglⅡ和SpeⅠ對(duì)原有