蛋白酶體抑制劑硼替佐米耐藥白血病細(xì)胞系的建立及其耐藥機(jī)制研究.pdf

1、目的： 明確蛋白酶體抑制劑硼替唑米的耐藥機(jī)制及其與多藥耐藥的關(guān)系。 方法： 采用低劑量誘導(dǎo)和大劑量反復(fù)篩選相結(jié)合的方法自Jurkat建立硼替唑米耐藥細(xì)胞株JurkatB，并觀察比較其細(xì)胞生物學(xué)特性，分析有與多藥耐藥表現(xiàn)，檢測(cè)多藥耐藥相關(guān)基因的表達(dá)，檢測(cè)P-gp的表達(dá)和功能，檢測(cè)硼替唑米作用位點(diǎn)糜蛋白酶樣活性所在的蛋白酶體β 5亞基(PSMB5)基因的表達(dá)水平及突變，分析糜蛋白酶樣活性及硼替唑米作用后酶活性抑制率，

2、檢測(cè)硼替唑米作用后的IкBα變化。 結(jié)果： 建立了不同耐藥倍數(shù)的硼替唑米耐藥株JurkatBs。JurkatBs與Jurkat的細(xì)胞倍增時(shí)間、集落形成率、細(xì)胞周期分布等無(wú)顯著差異。硼替唑米對(duì)JurkatBs細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，細(xì)胞周期阻滯及凋亡誘導(dǎo)作用顯著下降，JurkatBs對(duì)其它化療藥物無(wú)交叉耐藥，無(wú)顯著外排藥物功能。除JurkatB2以外的硼替唑米耐藥株存在PSMB5基因擴(kuò)增，糜蛋白酶樣活性增高，染色體i(14q)核

3、型。JurkatB細(xì)胞出現(xiàn)PSMB5基因G322A點(diǎn)突變，導(dǎo)致氨基酸水平A108T替換，硼替唑米對(duì)耐藥細(xì)胞株糜蛋白酶樣活性的抑制率下降，提示該酶活性位點(diǎn)與藥物的親和力下降。與Jurkat細(xì)胞相反，JurkatB5細(xì)胞內(nèi)的IкB-α水平在硼替唑米作用后逐漸減低，表明藥物作用后NF-кB活性逐漸增加出現(xiàn)抗凋亡特性。耐藥細(xì)胞株無(wú)MDR1基因的高表達(dá)，P-gP表達(dá)檢測(cè)陰性。JurkatB1，JurkatB5細(xì)胞MRP、LRP的表達(dá)顯著升高。